Отдых в пуле: Недопустимое название
Отдых в Пуле, Хорватия 2021
Описание курорта:
Пула является наиболее необычным и загадочным городом в Хорватии. Это обусловлено, в первую очередь, его богатой историей, которая чрезвычайно сильно повлияла на его культуру, архитектуру, традиции. Тут есть что посмотреть, однако при этом Пулу невозможно охарактеризовать как милый и симпатичный город. Он является все-таки сильным и несколько холодным. Однако при этом тут есть большое количество уютных уголков, которые представляют собой как бы отрывки из прошлого. Пула удивляет и разочаровывает одновременно, тут соединяется множество несовместимых, на первый взгляд, вещей, которые создают уникальный и неповторимый образ.
Первые следы жизни человека обнаружили в пещере Sandalj, которая находится возле Пулы, примерно 1 миллион лет до нашей эры. Город Nezakcium является центром древнейшей этнической группы полуострова — племени Histri, он тоже расположен в пригороде Пулы.
Ими был основан «Город убежищ», поскольку они не могли возвратиться без золотой овечьей шерсти. Связь этой местности с культурой Древней Греции подтверждается большим количеством предметов из раскопок, в числе которых есть и глиняная посуда, и остатки статуи Аполлона. В 45-46 годах до нашей эры Пуле присвоили статус Римской колонии, что вызвало ее интенсивное развитие. Позднее император Октавиан превратил Пулу в императорский город, об этом свидетельствуют и произведения римской архитектуры — Храм Августа, триумфальная арка Сергиуса.
Первую туристическую поездку в Пулу зарегистрировали в первой половине девятнадцатого века. В 1832 году в Пулу приезжал император Австрии Фердинанд I. Впоследствии в городе открыли несколько пляжей, отели, летние лагеря. В настоящее время Пула предлагает множество прекрасных возможностей для отдыха: отлично оборудованные гостиницы, большое количество спортивных площадок, террасы с живой музыкой, развлечения, дискотеки, рестораны, казино.
Нет никаких сомнений, что чудесный городок Пула покорит сердца туристов, которые ищут незабываемый отдых. Город пронизывает дух творчества, издавна и до наших дней он привлекает композиторов, художников, архитекторов, дизайнеров. Именно здесь они могут почерпнуть идеи для создания удивительных произведений. Пула является свидетельницей событий, которые творились задолго до наступления нашей эры, по преданию ее основал сам Одиссей. Она может и сегодня поведать через свои музеи и памятники о событиях минувших дней.
Как добраться:
Международный аэропорт расположен недалеко от города. В самом центре города имеется автовокзал, по улице Mate Balote. До Риеки из центра ходит восемнадцать регулярных автобусных маршрута, до города Пореча 12 маршрутов, 20 рейсов ежедневно отправляются до Равиня, а до Загреба только 8 регулярных рейсов.
Маршрут №2 доставит вас до знаменитого комплекса Пунта Верудела. График движения рейсов начинается в шесть утра и заканчивается половина одиннадцатого вечера, маршруты отходят с периодичностью от 15 до 30 минут, а билет стоит 8 кун.
Неподалеку, всего в одном километре от города расположен железнодорожный вокзал.
Время перелета из Москвы: 3
Все об отдыхе в Пуле: отзывы, советы, путеводитель
В Хорватии Адриатическое море, которое нам показалось прохладным. Несколько раз шли дожди днём и было прохладно, что приходилось надевать ветровку. О купании в такую погоду и речи не шло. Большинство дней было солнечно и мы с удовольствием купались.
Я думаю, что в августе будет более устойчивая погода, без дождей и вода в море будет теплее.
Курорт располагает к размеренному образу жизни, и воздух сосен создаёт впечатление хвойного парка. Старшее поколение будет в восторге от тихих пеших прогулок по пляжу и купанию в спокойном море.
Обязательно возьмите лекарства. Тут есть аптеки, но цены в них сильно завышены. Не забудьте фотоаппарат, видеокамеру, маску или очки для плавания, и тёплую кофту на случай дождя.
Из Хорватии мы ездили в Венецию на весь день. Это очень популярная экскурсия. Плыли мы на корабле чуть меньше трёх часов. В Венеции мы покатались на гондоле и сделали кучу фотографий на Площади Святого Марко. Свободного времени на экскурсии всего лишь 5 часов, поэтому мы гуляли в быстром темпе, чтобы успеть побольше посмотреть. Минут 20 мы потратили на посещение сувенирных магазинов. Другой день мы потратили на посещение Плитвицких Озер. Очень интересная экскурсия, где мы посетили красивые озёра. Только погода нас повела, был небольшой дождь. Но даже дождь не смог испортить эту невероятную красоту, которую даже сложно словами передать.
Водичка прохладная, но чистая. Здесь, пожалуй, собраны все оттенки бирюзового, красиво. На пляже много людей, но можно легко отойти немного дальше и людей уже не будет и можно спокойно плавать и загорать. Можно взять за пару евро лежак, но мы не брали, потому что практически не лежали на пляже.
Стоит однозначно посетить местные магазинчики чтобы купить местный алкоголь, который все хвалят. А на экскурсии в Венеции, обязательно стоит купить маленькую гондолу, которая будет напоминать об этом отпуске. Ну и конечно же, купить карнавальные маски.
В Хорватии цена на местный алкоголь очень разная. За несколько евро можно купить маленькую сувернирную бутылочку с алкоголем, а за 12 евро, можно уже купить бутылку объёмом 0,5 литров.
Практически каждый день, кроме экскурсионных дней, мы обедали в небольших кафе со средиземноморской кухней. Вечером иногда ходили выпить вина.
Вкусная кухня, особенно понравились морепродукты. Свежие и вкусные. Обслуживание не слишком быстрое, но чаевые творят чудеса. Порции в кафе большие, поэтому можно наесться. Один раз брали пиццу, но не понравилась.
Цены в кафе недешёвые, и самый скромный обед на двоих, обойдётся не меньше чем в 40 евро.
Красивое, чистое море и приятный сосновый аромат. Понравилась возможность находясь в одной стране, съездить на экскурсию в другую страну.
Существенных минусов мы не нашли. К небольшому минусу можно отнести большое количество туристов.
Один раз стоит съездить, чтобы изучить подводный мир Адриатического моря, насладиться запахами сосен, посетить очень красивые места. Тут можно отправиться на разные экскурсии, и насладиться природой и культурой Хорватии, но нужно ехать не меньше, чем на 2-3 недели, чтобы успеть всё увидеть.
Отдых в Пуле 2021! Самые низкие цены на туры в Пулу: экскурсии, пляжи и отели.
Отдых в Пуле 2021! Самые низкие цены на туры в Пулу: экскурсии, пляжи и отели.Автобусные туры в Пулу из Минска, в самый северный хорватский город-курорт, интересны и заманчивы. Ведь история Пулы хранит в себе много тайн и преданий. Одна легенда рассказывает, что Пула основана аргонавтами в то время, когда они искали золотое руно. Столетняя история отложила на Пуле свой отпечаток в виде роскошного архитектурного обличия.
Приезжающие туристы отмечают что первое, на что они обращают внимание – это древнеримский амфитеатр, который и является основной достопримечательностью Пулы. Когда-то в стенах этой достопримечательности проводились гладиаторские бои, да и сейчас здесь проходят мероприятия, оперные программы и шоу.В Пуле есть и археологический музей, хранящий найденные на территории Истры предметы старины. Там действительно есть на что взглянуть, ведь огромная коллекционная часть представлена 2-6 веком. В каменном здании в виде звезды с бастионами находится Исторический Морской Музей. Всю историю мореходства вы найдете в музее: оружейные предметы, карты, монетки и многое другое.
Экскурсионные туры в Пула
{{:tour_views}}{{:trans}}
Города:{{:route}}
{{:sights}}Ближайшая дата: {{:dates}}
Показать ещеОстрова Бриуны отделены от Пулы проливом Фажана. Но вам обязательно нужно туда съездить, так как там есть на что посмотреть. Римский дворец, храм Венеры, церковь Св. Марии, церковь Св. Германа. Острова Бриуны считаются самым шикарным курортом.
Отметим, что отдых в Пуле создан для дайверов. Кому не интересно будет взглянуть на затонувший давно корабль «Барон Гош», лежащий на глубине 28-42 метра? Даже видавший виды дайвер будет не прочь поглазеть на это.
Так что туристическая компания People Travel советует осуществить подбор тура в Пулу. Рейтинг: 10/10 — 2 голосаХорватия, отдых в Пуле 2020. Погода в Пуле, температура воды и воздуха. Туры в Пулу цены 2020.
Отдых в Пуле цены 2020. Спецпредложения и горящие туры в Пулу на данный момент времени:
Пула – самый большой город на территории полуострова Истрия. Если сравнивать Пулу с другими курортами Хорватии, то город кажется настоящим мегаполисом – шумным и оживлённым. Удобное расположение Пулы всегда делало его привлекательным для торговли и размещения военного и торгового флота. Согласно легенде, город основали колхи – выходцы из древней Грузии. Несколько кораблей колхов, преследовавшие похитителей Золотого Руна, так и не смогли угнаться за хитроумными и искусными в морском деле греками, и обрекли себя на изгнание в этих краях, постыдившись вернуться с пустыми руками в родную Колхиду.
На самом деле, впервые Пула упоминается в связи с основанием в этой живописной местности римского города с портом в 45-46 годах до нашей эры. Хотя поселение на юге Истрии существовало на то время уже достаточно давно, именно римлянам принадлежит заслуга того, что город на семи холмах возле изумительной по красоте бухты стал крупным военным и торговым центром региона.
После распада Римской империи, Пула долго переходила из рук в руки. Город принадлежал остготам, славянам, лангобардам, франкам. Каждый народ внёс свою лепту в богатое наследие приморского города. В 12 веке Пула стала частью Венеции и была вынуждена на себе испытать все тяготы постоянных войн, которые непрерывно вело Венецианское государство со своими ближними и дальними соседями за господство в этой части Средиземноморья. Вместе с войнами жители города познали массовые разрушения, от которых в первую очередь пострадали древние римские постройки, а также город посетили эпидемии чумы и холеры.
Новая жизнь у Пулы началась после падения Венецианской республики в войне с Францией – город стал развиваться и отстраиваться, а когда в 1813 году город отошёл к Австрии, быстрыми темпами начала развиваться промышленность. Начало двадцатого века было ознаменовано включением Пулы в состав Италии, вследствие чего сильно изменился национальный состав населения. Когда после Второй Мировой войны Пула была включена в состав независимой Югославии – это был более чем наполовину итальянский город.
На сегодняшний день итальянская диаспора в Пуле не так велика, но влияние культуры соседей по региону чувствуется везде, и итальянский язык так же распространён в городе, как и хорватский.
Отели Пулы
Самый недорогой вариант проживания в Хорватии в Пуле – это съём апартаментов у местных риэлторов. Можно снять комнату или даже целую квартиру по приемлемой цене. Но стоит учитывать, что отдых в Пуле привлекает каждый сезон несколько сотен тысяч туристов и об аренде жилья стоит позаботиться заранее. В Пуле (Хорватия) отели не всегда могут вместить всех желающих.
Любители исключительного комфорта и истинного европейского сервиса наверняка останутся довольны, поселившись в отели Пулы 5 звёзд и отели Пулы 4 звезды. Отельные комплексы такого класса обычно имеют собственные теннисные корты, бассейны, рестораны.
Развлечения в Пуле
Пула 2020 – крупный туристический центр с развитой инфраструктурой, поэтому скучать во время отдыха не придётся никому. Большое количество достопримечательностей всех эпох расположены в городе и его окрестностях. Жители гордятся историей своего города и берегут его исторические памятники, что не мешает, впрочем, использовать некоторые античные сооружения, такие как римская Арена, для проведения фестивалей и концертов звёзд.
Любители пляжного отдыха по достоинству оценят местные пляжи. Несмотря на то, что почти все пляжи города галечные или выполнены в виде бетонных платформ, лазурные волны тёплого Адриатического моря не оставляют равнодушным ни одного приезжего, а богатый подводный мир сможет подарить незабываемые впечатления любителям ныряния и подводной охоты.
Пула – один из самых популярных в Хорватии молодёжных курортов, ведь таким количеством ночных клубов, дискотек и просто танцевальных площадок не может похвастаться ни один курорт страны.
С 1953 года город стал ещё и кинематографической столицей Югославии. Ежегодный фестиваль кино собирал множество кинозвёзд европейского и мирового масштаба. Сейчас фестиваль продолжает радовать любителей кино в августе, хотя после распада Югославии он и потерял своё международное значение.
Преимущества туров в Пулу
Путешествие в Пулу не вызовет неудобств. У города есть свой международный аэропорт, который принимает регулярные чартерные рейсы из российских городов. Также удобное расположение города и отличные дороги позволяют совершать приятные экскурсии из Пулы по всему полуострову Истрия на автобусе или автомобиле, а при помощи морского транспорта с увлекательной экскурсией можно будет посетить итальянские города Триест и Венеция.
Климат в Пуле
В Пуле, как и в любом городе полуострова Истрия, господствует типичный средиземноморский климат с тёплым и продолжительным пляжным сезоном, когда температура воздуха находится в промежутке между +23-+27 градусами, и тёплой и короткой зимой без снега. Погода в Пуле большую часть года ясная и солнечная.
Любители морских купаний могут наслаждаться морскими ваннами с мая по октябрь. Температура воды в Пуле в этот период обычно держится в районе от +18 до +24 градусов. Погода Пулы (Хорватия) больше подходит для пляжного отдыха в период с июля по середину сентября.
Едем в Пулу! Советы по отдыху и отзывы
Одни приезжают в Пулу позагорать на пляжах, другие занимаются дайвингом, а третьи весь отпуск знакомятся с античной историей. Город на южной оконечности полуострова Истрия нравится всем! Узнайте из отзывов, что посмотреть, какие на курорте пляжи и в каких отелях лучше остановиться.
Впечатление от курорта
Самый большой город на полуострове Истрия — пожалуй, один из самых красивых курортов Хорватии. Пула была основана древними греками как удобный порт на Адриатике. Современный курорт славится уникальными памятниками Римской империи и Средневековья, что привлекает много туристов. Пулу любят за хорошие галечные и каменистые пляжи, удивительно красивые улицы, старинный амфитеатр и храмы.
Natali: «Пула расположена совсем недалеко от Италии и идеально подходит для спокойного отдыха. Воздух чистейший, вода прозрачнейшая. Морской воздух и аромат сосен — идеальное сочетание для приверженцев экотуризма, постоянно проживающих в крупных мегаполисах».
Александр: «Никаких дискотек и громкой назойливой музыки из динамиков. Идиллия красоты и тишины. Чистота и порядок. Гулять по лесным дорожкам вдоль моря можно до самой темноты. А какие виды!»
Современный курорт славится уникальными памятниками Римской империи и Средневековья. Фото: dbajurin / Depositphotos.com.Лучшие отели
Пула встречает гостей хорошими отелями 3-5* и уютными мини-гостиницами. Вы можете снять номер в семейных апартаментах, расположиться в кемпинге или арендовать роскошную виллу. Летом хорватский курорт очень популярен у туристов, поэтому бронируйте понравившийся номер заранее! И лучше искать жилье на сервисе Хотеллук, а туры в Пулу – на Травелате.
Лучшие отели Пулы, по отзывам туристов:
Suzy 3* — гостевой дом в 50 м от галечного пляжа, в южных окрестностях города. В высокий сезон номер на двоих стоит от 60 €.
San Martino Rooms 3* — гестхаус в центре, в шаговой доступности от главных достопримечательностей Пулы. За двухместный номер вы заплатите от 100 €.
Rooms K&T sea side luxury 4* — комфортный отель в 450 м от пляжа Stoja. Номер на двоих обойдется в 120 €.
City Centre 4* — отличный выбор для туристов, которые хотят жить со всеми удобствами в центре города. Двухместный номер стоит от 125 €.
Villa Sunce 5* — роскошное жилье на восьмерых с бассейном, в 6 км от амфитеатра Пулы. Аренда виллы в сутки стоит 447 €.
Villa Kata 5* — чудесная вилла на 7-10 гостей с тремя спальнями и собственным бассейном. Аренда в сутки стоит 460 €.
Узнайте о лучших отелях Хорватии с песчаным пляжем.
Пляжи Пулы
Полуостров Истрия в Хорватии не подходит любителям мягкого песка. Все пляжи в Пуле — галечные и каменистые. В курортной зоне более 40 оборудованных бесплатных пляжей. Лучшие пляжи Пулы, по отзывам туристов — Stoja, бухта Gortanova, Valkane, Vile Stinjan и пляжи на полуострове Verudela, в 4 км от Старого города. Большинство из них отмечены почетным Голубым флагом.
Вход в воду пологий. Там, где глубина начинается сразу возле берега, спуски в море оборудованы поручнями или ступеньками.
По камням и крупной гальке неудобно ходить босиком, поэтому советуем купаться в пляжной обуви! Она убережет ноги от порезов и колючек морских ежей, которые водятся на мелководье.
Brandon: «Истрия изрезана бухтами, это очень хорошо, вода чистая и прозрачная. По-настоящему организованного и удобного пляжа со входом нет, весь берег это и есть пляж, так что гуляете и приглядываете себе сами удобное место. Однозначно требуется специальная обувь».
Бухта рядом с Verudela. Фото: dinogeromella / unsplash.com.Что посмотреть
Главные достопримечательности Пулы расположены очень компактно — в Старом городе. Туристы начинают путешествие по курорту с амфитеатра, который был построен римлянами в I веке нашей эры. В маршруты по городу стоит включить и другие памятники римского зодчества — Арку Сергиев, Храм Августа и Геркулесовы ворота. В Пуле сохранился средневековый комплекс построек Францисканского монастыря. Если вы увлекаетесь литературой, посетите места, где жил и творил ирландский писатель Джеймс Джойс.
Natalia: «Римский амфитеатр выглядит поскромнее, чем в Риме, но все равно смотрится потрясающе, особенно если учитывать его возраст. В самом городе трудно заблудиться, улочки узкие, как в Средневековье, и все пути выходят к морю».
Римский амфитеатр в Пуле. Фото: niels_to / unsplash.com.Отдых с детьми
Кроме пляжного отдыха, в Пуле достаточно развлечений! Родители с детьми с удовольствием ходят в местный аквариум, приятно проводят время в веревочном городке Adventure Park Pula и парке аттракционов Green Garden Pula.
Сходите всей семьей в Исторический морской музей, который находится в старой крепости Каштел. Если вы подниметесь на средневековую башню, то сможете полюбоваться Пулой с высоты. Очень приятное место для прогулок — зеленый Морской парк.
Покажите ребенку оригинальную достопримечательность курорта — небольшой фонтан в виде объемного плана города. Рассмотрите улицы, по которым вы уже ходили, и наметьте новые маршруты по Пуле!
Севиль: «Как любой уважающий себя город, Пула имеет свою объемную миниатюру. Маленький фонтанчик наполняет море».
Пула нравится семьям с детьми. Фото: christoph_sammer / flickr.com.Когда лучше ехать
Пула находится в зоне действия мягкого средиземноморского климата. С апреля по октябрь на курорте теплая и сухая погода. Пляжный сезон, как и почти везде в Хорватии, длится с мая по конец сентября — начало октября. В конце весны вода в Адриатическом море еще прохладная, поэтому многие отели Пулы открываются только в июне.
Хвойные леса и свежие морские ветры значительно смягчают летний зной. По-настоящему жарко только в июле и августе. Июнь и сентябрь в Пуле считают идеальными месяцами для отдыха с детьми и пожилых туристов.
Маша Красикова: «В июле по-летнему солнечно и ожидаемо жарко. К полудню +28…+34°С, однако у моря комфортно — бриз освежает. Вечером температура падает, но не экстремально. Ниже +20°С не бывает. Замерзнуть сложно».
Пула. Фото: unsplash.com / @kowalikus.Выводы: стоит ли ехать в Пулу
Хорватский курорт — замечательное место для любителей экскурсионного туризма, родителей с детьми и туристов в возрасте. Пулу любят за теплый климат, спокойную атмосферу, чистые пляжи, современную инфраструктуру и красивую историческую часть города. На курорт также приезжают ради дайвинга. Сезон погружений в западной Хорватии достаточно длинный — с мая по октябрь. Все эти месяцы видимость под водой превышает 20 м.
Первое фото: Vera_Petrunina / Depositphotos.com.
Стоковые фото: Depositphotos.com.
где купаться? Пляжный отдых в Пуле – tripmydream
Пула — не просто город с богатой тысячелетней историей и интересными достопримечательностями. Чистейшие воды Адриатического моря и ароматные сосновые леса создают идеальные условия для пляжного отдыха, восстановления физических и душевных сил.
Пляжи Пулы — преимущественно скальные, расположенные в уютных бухтах, либо бетонированные с оборудованными входами в море.
Конкуренцию курортной зоне Punto Verudela составляет Медулин. Мелкогалечные пляжи здесь «оправлены» в кольцо средиземноморской зелени. Плата за вход на пляжи не взимается, стоимость аренды лежаков и зонтов не превышает 15 НRК.
Stinjan — один из красивейших пляжей Истрии. Галечный «амфитеатр» со всех сторон окружен зеленой порослью. Здесь организованы удобные центры проката спортивного инвентаря, площадки для пляжного волейбола. В шаговой доступности — дайвинг-центр, дорожки для велосипедных прогулок, а также ресторан хорватской кухни с чарующим видом на острова Бриуни.
Песчано-галечная отмель оборудована подъездами-платформами и спусками для людей с ограниченными возможностями. В инфраструктуру комплекса включены спортивные центры и рестораны. Иногда в местных водах встречаются морские ежи, поэтому во время семейного отдыха с детьми в Пуле лучше запастись специальными защитными тапочками.
Отличные места для купания имеются в бухте Валсалине.
Один из самых лучших пляжей в окрестностях Пулы располагается в 13 км от города, на мысе Каменьяк на южной оконечности полуострова Истрия. Этот район провозглашен природным парком.
В Пуле и ее окрестностях есть много интересных мест для отдыха: островные скалистые пляжи Crveni Otok, уединенные галечные полоски Duga Uvala с пологим входом и живописными видами, песчаные пляжи Bijeca.
Особняком в этом ряду стоят пляжи полуострова Verudela, в том числе Ambrela с чистейшей акваторией и огромным выбором водных развлечений, Brioni с яркой развлекательной программой. Всего на территории курортной зоны расположено 44 пляжа, удостоенных голубых флагов Евросоюза за безупречную чистоту и экологичность.
Семейный отдых с детьми в Пуле. Куда пойти, что посмотреть с ребенком
В Пуле отдыхающим с детьми представлен достойный выбор развлечений, отличным местом для отдыха на свежем воздухе будет парк Franz Joseph i park and king Zvonimir’s. Этот ухоженный парк со множеством ландшафтных украшений примечателен тем, что на его территории оборудованы игровые площадки для детей. Парк довольно большой, в нем много зелени, оборудованных дорожек для прогулок и просторных зеленых лужаек, на которых тоже обязательно понравится отдыхать детям. Самым роскошным отелем Пулы считается Boutique Hotel Villa Vulin, этот фешенебельный бутик-отель находится в живописном тихом районе, рядом с сосновым лесом. Для гостей в отеле подготовлено всего 6 люксовых … Открыть С детьми школьного возраста обязательно стоит посетить самый популярный картинг-центр Пулы — Green Garden Pula. Он является открытым и отличается первоклассным современным оснащением, здесь отлично покататься и развлечься можно даже с маленькими детьми. В центре работает команда профессиональных инструкторов, поэтому отдохнуть здесь будет интересно даже новичкам в данном виде развлечения. Находится картинг-центр в невероятно красивой природной местности, в окружении живописных лесов, поэтому у всех его посетителей будет возможность дополнить отдых пешей прогулкой. Пула очень популярна у поклонников водных видов спорта, некоторые спортивные центры модно посетить с детьми. Отличным примером является современный дайвинг-центр Orca Diving Center Pula, где и взрослых, и детей могут быстро обучить азам подводного плавания. Этот центр очень популярен у туристов с подростками, занятия для новичков в нем организуют на самых живописных мелководных пляжах курорта. Опытные ныряльщики могут заказать выезд к самым интересным для погружения местам. Копирайт www.orangesmile.com В Пуле есть чудесные отели для отдыха вдвоем, отличным вариантом будет Boutique Hotel Oasi. Этот бутик-отель расположен в сказочно красивом средиземноморском саду, в нескольких шагах от побережья, … Открыть Парк развлечений Adventure Park Pula тоже обязательно придется по душе тем, кто любит активный отдых. В этом парке для посетителей оборудован большой веревочный городок с многообразием аттракционов, полос препятствий и мест для отдыха. Значительная часть аттракционов подходит в том числе и для детей, в этом парке не будет скучно даже самым маленьким посетителям. В Пуле работает отличный аквариум Aquarium Pula, который тоже обязательно понравится детям. В нем собрана богатая коллекция обитателей морских глубин, среди которых красочные рыбки, редкие представители ракообразных, медузы и морские звезды, а также очень милые морские черепашки. Аквариум отличается довольно оригинальным оформлением, он оборудован прямо в скале. С вершины этой скалы открывается чудесный вид на город и побережье, эти места очень популярны у любителей пеших прогулок. Пула впечатлит всех любителей шопинга, в городе повсюду можно обнаружить привлекательные магазины, современные торговые центры и мастерские, в которых продают эксклюзивные товары. Много … Открыть Тем, кто будет отдыхать в Пуле в теплое время года, обязательно стоит побывать с детьми в самых красивых городских парках. Одним из самых интересных для прогулок считается City of Graz park, он является настоящим музеем под открытым небом. Когда-то на территории этого парка археологами были обнаружены фрагменты античных построек, которые решено было оставить на своих местах и представить всеобщему обозрению. Сегодня главными украшениями парка являются античные каменные изваяния, прикоснуться к которым и почувствовать дух истории могут абсолютно все. Для детей в парке оборудована красочная игровая площадка с горками и качелями. В теплое время года у отдыхающих очень популярны лодочные туры, они будут идеальным вариантом семейного отдыха. Интересные туры предлагает своим клиентам компания Korkyra Tour, здесь можно заказать и выезды на рыбалку, и специальные туры, во время которых можно понаблюдать за дельфинами. Во время лодочных экскурсий участникам всегда предлагают популярные угощения и напитки, отдых в атмосфере полного комфорта гарантирован. Эта статья о семейном отдыхе с детьми в Пуле защищена законом об авторских правах. Полная перепечатка разрешена только при указании источника с прямой ссылкой на www.orangesmile.com.
Алло, справочная?
Знаменитые достопримечательности Пулы
Амфитеатр Пулы
Из серии “Действующие древние амфитеатры и арены” В Хорватии самый известный и хорошо сохранившийся амфитеатр следует искать в Пуле. Строительство античного памятника длилось более сорока лет и было завершено в 68 году н.э., сегодня он является постоянным местом проведения театральных представленный, военных торжественных мероприятий, общественных собраний и феерических концертов. Античный памятник прекрасно сохранился до наших дней, в нем чудом уцелели и все три римских ордена и четыре башни, по масштабам амфитеатр Пулы занимает шестое место в мире. … Читать полностью Пул— Get — REST API (пакетная служба Azure)
Получает информацию об указанном пуле.
В этой статье
GET {batchUrl} / пулы / {poolId}? Api-version = 2021-06-01.14.0
С дополнительными параметрами:
GET {batchUrl} / pools / {poolId}? $ Select = {$ select} & $ expand = {$ expand} & timeout = {timeout} & api-version = 2021-06-01.14.0
Параметры URI
Имя | В | Требуется | Тип | Описание |
---|---|---|---|---|
партия | путь | Правда | Базовый URL-адрес для всех запросов пакетной службы Azure. | |
бассейн | путь | Правда | ID пула, который нужно получить. | |
api-версия | запрос | Правда | Версия клиентского API. | |
$ развернуть | запрос | Предложение OData $ expand. | ||
$ выбрать | запрос | Предложение OData $ select. | ||
таймаут | запрос | int32 | Максимальное время, которое сервер может потратить на обработку запроса, в секундах. По умолчанию 30 секунд. |
Заголовок запроса
Типы носителей: «application / json; odata = minimalmetadata»
Имя | Требуется | Тип | Описание |
---|---|---|---|
идентификатор-запроса-клиента | uuid | Идентификатор запроса, сгенерированный вызывающим абонентом, в форме GUID без украшения, например фигурных скобок, e.грамм. 9C4D50EE-2D56-4CD3-8152-34347DC9F2B0. | |
идентификатор-запроса-возврата-клиента | Должен ли сервер возвращать идентификатор запроса клиента в ответе. | ||
ocp-date | дата-время-rfc1123 | Время отправки запроса. Клиентские библиотеки обычно устанавливают текущее системное время; установите его явно, если вы вызываете REST API напрямую. | |
Если совпадение | Значение ETag, связанное с версией ресурса, известной клиенту. Операция будет выполнена только в том случае, если текущий ETag ресурса в службе точно соответствует значению, указанному клиентом. | ||
Если-нет-совпадение | Значение ETag, связанное с версией ресурса, известной клиенту.Операция будет выполнена только в том случае, если текущий ETag ресурса в службе не соответствует значению, указанному клиентом. | ||
If-Modified-Since | дата-время-rfc1123 | Отметка времени, указывающая время последнего изменения ресурса, известного клиенту. Операция будет выполнена только в том случае, если ресурс в службе был изменен с указанного времени. | |
Если-Неизмененный-С | дата-время-rfc1123 | Отметка времени, указывающая время последнего изменения ресурса, известного клиенту.Операция будет выполнена только в том случае, если ресурс в службе не изменялся с указанного времени. |
Ответы
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
200 ОК | Ответ, содержащий пул. Заголовки
| |
Другие коды состояния | Ошибка пакетной службы. |
Безопасность
azure_auth
Поток OAuth3 для Azure Active Directory
Тип:
oauth3
Поток:
неявный
URL-адрес авторизации:
https://login.microsoftonline.com/common/oauth3/authorize
Прицелы
Имя | Описание |
---|---|
user_impersonation | Выдайте себя за свою учетную запись пользователя |
Авторизация
Тип:
apiKey
В:
заголовок
Примеры
Получите пул VirtualMachineConfiguration с расширениями
Образец запроса
GET аккаунт.region.batch.azure.com/pools/pool?api-version=2021-06-01.14.0
идентификатор-запроса-клиента: 00000000-0000-0000-0000-000000000000
ocp-date: пт, 17 фев 2017, 00:00:00 GMT
Пример ответа
{
"id": "пул",
"url": "https://account.region.batch.azure.com/pools/pool",
«eTag»: «0x8D413091E739A56»,
"lastModified": "2016-11-22T18: 55: 25.2608598Z",
"creationTime": "2016-11-22T18: 55: 24.2632496Z",
"состояние": "активный",
«stateTransitionTime»: «2016-11-22T18: 55: 24.2632496Z ",
"allocationState": "устойчивый",
"allocationStateTransitionTime": "2016-11-22T18: 55: 24.8154041Z",
"vmSize": "standard_a1",
"resizeTimeout": "PT15M",
"currentDedicatedNodes": 0,
"currentLowPriorityNodes": 0,
"targetDedicatedNodes": 0,
"targetLowPriorityNodes": 0,
"enableAutoScale": ложь,
"enableInterNodeCommunication": false,
"startTask": {
"commandLine": "/ bin / bash -c 'эхо-запуск задачи'",
"userIdentity": {
"autoUser": {
"scope": "task",
"elevationLevel": "nonadmin"
}
},
"maxTaskRetryCount": 0,
"waitForSuccess": ложь
},
"taskSlotsPerNode": 1,
"taskSchedulingPolicy": {
"nodeFillType": "распространение"
},
"virtualMachineConfiguration": {
"imageReference": {
"издатель": "Канонический",
"предложение": "0001-com-ubuntu-server-focal",
"sku": "20_04-lts",
"версия": "последняя"
},
"nodeAgentSKUId": "пакет.node.ubuntu 20.04 ",
"расширения": [
{
"имя": "batchextension1",
"type": "SecurityMonitoringForLinux",
"издатель": "Microsoft.Azure.Security.Monitoring",
"typeHandlerVersion": "1.0",
"autoUpgradeMinorVersion": true,
"settings": "{\" settingsKey \ ": \" settingsValue \ "}"
}
]
}
}
Пул получает
Образец запроса
GET account.region.batch.azure.com/pools/pool?api-version=2021-06-01.14.0
идентификатор-запроса-клиента: 00000000-0000-0000-0000-000000000000
ocp-date: пт, 17 фев 2017, 00:00:00 GMT
Пример ответа
{
"id": "пул",
"url": "https://account.region.batch.azure.com/pools/pool",
«eTag»: «0x8D413091E739A56»,
"lastModified": "2016-11-22T18: 55: 25.2608598Z",
"creationTime": "2016-11-22T18: 55: 24.2632496Z",
"состояние": "активный",
"stateTransitionTime": "2016-11-22T18: 55: 24.2632496Z",
"allocationState": "устойчивый",
«allocationStateTransitionTime»: «2016-11-22T18: 55: 24.8154041Z ",
"vmSize": "standard_a1",
"resizeTimeout": "PT15M",
"currentDedicatedNodes": 0,
"currentLowPriorityNodes": 0,
"targetDedicatedNodes": 0,
"targetLowPriorityNodes": 0,
"enableAutoScale": ложь,
"enableInterNodeCommunication": false,
"startTask": {
"commandLine": "/ bin / bash -c 'эхо-запуск задачи'",
"userIdentity": {
"autoUser": {
"scope": "task",
"elevationLevel": "nonadmin"
}
},
"maxTaskRetryCount": 0,
"waitForSuccess": ложь
},
"taskSlotsPerNode": 1,
"taskSchedulingPolicy": {
"nodeFillType": "распространение"
},
"virtualMachineConfiguration": {
"imageReference": {
"издатель": "Канонический",
"предложение": "0001-com-ubuntu-server-focal",
"sku": "20_04-lts",
"версия": "последняя"
},
"nodeAgentSKUId": "пакет.node.ubuntu 20.04 "
}
}
Определения
AllocationState
Указывает, изменяется ли размер пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
изменение размера | Размер пула изменяется; то есть вычислительные узлы добавляются в пул или удаляются из него. | |
устойчивый | Размер пула не изменяется.Количество текущих вычислительных узлов в пуле не меняется. Пул переходит в это состояние, когда он создается и когда с пулом не выполняются никакие операции по изменению количества вычислительных узлов. | |
остановка | Размер пула изменялся, но пользователь запросил остановку изменения размера, но запрос остановки еще не был выполнен. |
ApplicationPackage Ссылка
Ссылка на пакет, который будет развернут на вычислительных узлах.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
applicationId | Идентификатор развертываемого приложения. | |
версия | Версия развертываемого приложения. Если не указано, развертывается версия по умолчанию. |
AutoScaleRun
Результаты и ошибки при выполнении формулы автомасштабирования пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
ошибка | Подробная информация об ошибке, возникшей при оценке формулы автомасштабирования в пуле, если оценка была неудачной. | |
полученные результаты | Окончательные значения всех переменных, используемых при вычислении формулы автомасштабирования. | |
отметка времени | Время последнего вычисления формулы автомасштабирования. |
AutoScaleRunError
Ошибка при выполнении или оценке формулы автомасштабирования пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
код | Идентификатор ошибки автомасштабирования. Коды инвариантны и предназначены для программного использования. | |
сообщение | Сообщение об ошибке автомасштабирования, предназначенное для отображения в пользовательском интерфейсе. | |
ценности | Список дополнительных сведений об ошибке, связанной с ошибкой автомасштабирования. |
AutoUserScope
Прицел для автопользователя
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
бассейн | Указывает, что Задача запускается как обычная автоматическая учетная запись пользователя, которая создается на каждом вычислительном узле в пуле. | |
задача | Указывает, что служба должна создать нового пользователя для Задачи. |
AutoUserSpecification
Задает параметры для автоматического пользователя, который запускает задачу в пакетной службе.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
высотаLevel | Уровень повышения автопользователя. | |
сфера | Область действия автоматического пользователя |
AzureBlobFileSystemConfiguration
Информация, используемая для подключения к контейнеру хранилища Azure с помощью Blobfuse.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
accountKey | Ключ учетной записи хранения Azure. | |
название аккаунта | Имя учетной записи хранения Azure. | |
blobfuseOptions | Дополнительные параметры командной строки для передачи команде монтирования. | |
containerName | Имя контейнера хранилища BLOB-объектов Azure. | |
identityReference | Ссылка на назначенный пользователем идентификатор для использования для доступа к containerName | |
relativeMountPath | Относительный путь на вычислительном узле, где будет смонтирована файловая система. | |
sasKey | Маркер SAS службы хранилища Azure. |
Информация, используемая для подключения к Azure Fileshare.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
accountKey | Ключ учетной записи хранения Azure. | |
название аккаунта | Имя учетной записи хранения Azure. | |
azureFileUrl | URL-адрес файлов Azure. | |
mountOptions | Дополнительные параметры командной строки для передачи команде монтирования. | |
relativeMountPath | Относительный путь на вычислительном узле, где будет смонтирована файловая система. |
BatchError
От пакетной службы Azure получен ответ об ошибке.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
код | Идентификатор ошибки. Коды инвариантны и предназначены для программного использования. | |
сообщение | Сообщение с описанием ошибки, предназначенное для отображения в пользовательском интерфейсе. | |
ценности | Набор пар «ключ-значение», содержащий дополнительную информацию об ошибке. |
BatchErrorDetail
Элемент дополнительной информации, включаемый в ответ об ошибке пакетной службы Azure.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
ключ | Идентификатор, определяющий значение свойства Value. | |
ценить | Дополнительная информация, включенная в ответ об ошибке. |
BatchPoolIdentity
Идентификатор пула пакетов, если он настроен.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
тип | Идентификатор пула пакетов, если он настроен. | |
userAssignedIdentities | Список идентификаторов пользователей, связанных с учетной записью пакетной службы. |
CachingType
Тип кэширования для диска.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
никто | Не включен режим кэширования для диска. | |
только чтение | Режим кэширования для диска — только чтение. | |
читай пиши | Режим кэширования для диска — чтение и запись. |
Сертификат Ссылка
Ссылка на сертификат, который должен быть установлен на вычислительных узлах в пуле.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
storeLocation | Расположение хранилища сертификатов на вычислительном узле, в которое устанавливается сертификат. | |
название магазина | Имя хранилища сертификатов на вычислительном узле, в которое устанавливается сертификат. | |
отпечаток большого пальца | Отпечаток сертификата. | |
thumbprintAlgorithm | Алгоритм, с которым связан отпечаток. Это должно быть sha1. | |
видимость | Какие учетные записи пользователей на вычислительном узле должны иметь доступ к личным данным сертификата. |
Сертификат Магазин Расположение
Расположение хранилища сертификатов на вычислительном узле, в которое устанавливается сертификат.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
текущий пользователь | сертификатов необходимо установить в хранилище сертификатов CurrentUser. | |
местная машина | Сертификаты должны быть установлены в хранилище сертификатов LocalMachine. |
CIFSMountConfiguration
Информация, используемая для подключения к файловой системе CIFS.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
mountOptions | Дополнительные параметры командной строки для передачи команде монтирования. | |
пароль | Пароль для аутентификации в файловой системе CIFS. | |
relativeMountPath | Относительный путь на вычислительном узле, где будет смонтирована файловая система. | |
источник | URI монтируемой файловой системы. | |
имя пользователя | Пользователь, который будет использоваться для аутентификации в файловой системе CIFS. |
CloudPool
Пул в пакетной службе Azure.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
allocationState | Указывает, изменяется ли размер пула. | |
allocationStateTransitionTime | Время, когда пул перешел в текущее состояние распределения. | |
applicationLicenses | Список лицензий приложений, которые пакетная служба сделает доступными на каждом вычислительном узле в пуле. | |
applicationPackageReferences | Список пакетов, которые должны быть установлены на каждом вычислительном узле в пуле. | |
autoScaleEvaluationInterval | Интервал времени, через который автоматически настраивается размер пула в соответствии с формулой автомасштабирования. | |
autoScaleFormula | Формула для желаемого количества вычислительных узлов в пуле. | |
autoScaleRun | Результаты и ошибки последнего выполнения формулы автомасштабирования. | |
сертификатСсылки | Список сертификатов, которые должны быть установлены на каждом вычислительном узле в пуле. | |
cloudServiceConfiguration | Конфигурация облачной службы для пула. | |
creationTime | Время создания пула. | |
currentDedicatedNodes | Количество выделенных вычислительных узлов, находящихся в настоящее время в пуле. | |
currentLowPriorityNodes | Число низкоприоритетных вычислительных узлов, находящихся в настоящее время в пуле. В это число включены | |
отображаемое имя | Отображаемое имя пула. | |
eTag | ETag пула. | |
enableAutoScale | Должен ли размер пула автоматически изменяться с течением времени. | |
enableInterNodeCommunication | Указывает, разрешает ли пул прямую связь между вычислительными узлами. | |
я бы | Строка, которая однозначно идентифицирует пул в учетной записи. | |
личность | Идентификатор пула пакетов, если он настроен. | |
Последнее изменение | Время последнего изменения пула. | |
метаданные | Список пар имя-значение, связанных с пулом в качестве метаданных. | |
mountConfiguration | Список файловых систем для монтирования на каждом узле в пуле. | |
конфигурация сети | Конфигурация сети для пула. | |
resizeErrors | Список ошибок, обнаруженных при последнем изменении размера пула. | |
resizeTimeout | Тайм-аут для выделения вычислительных узлов пулу. | |
startTask | Задача, которая должна выполняться на каждом вычислительном узле при присоединении к пулу. | |
штат | Текущее состояние пула. | |
stateTransitionTime | Время, когда пул перешел в текущее состояние. | |
статистика | Статистика использования и использования ресурсов за все время существования пула. | |
targetDedicatedNodes | Желаемое количество выделенных вычислительных узлов в пуле. | |
targetLowPriorityNodes | Требуемое количество низкоприоритетных вычислительных узлов в пуле. | |
taskSchedulingPolicy | Как задачи распределяются по вычислительным узлам в пуле. | |
taskSlotsPerNode | Количество слотов задач, которые можно использовать для одновременного выполнения задач на одном вычислительном узле в пуле. | |
url | URL-адрес пула. | |
учетные записи пользователей | Список учетных записей пользователей, которые будут созданы на каждом вычислительном узле в пуле. | |
virtualMachineConfiguration | Конфигурация виртуальной машины для пула. | |
vmSize | Размер виртуальных машин в пуле. Все виртуальные машины в пуле имеют одинаковый размер. |
CloudServiceConfiguration
Конфигурация для вычислительных узлов в пуле на основе платформы облачных служб Azure.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
osFamily | Семейство гостевых ОС Azure для установки на виртуальные машины в пуле. | |
osVersion | Версия гостевой ОС Azure, которая будет установлена на виртуальных машинах в пуле. |
ComputeNodeFillType
Как задачи распределяются по вычислительным узлам в пуле.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
пакет | Как можно больше задач (taskSlotsPerNode) должно быть назначено каждому вычислительному узлу в пуле, прежде чем какие-либо задачи будут назначены следующему вычислительному узлу в пуле. | |
распространять | Задачи должны быть равномерно назначены для всех вычислительных узлов в пуле. |
ComputeNodeIdentityReference
Ссылка на назначенный пользователем идентификатор, связанный с пулом пакетной обработки, который будет использовать вычислительный узел.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
resourceId | Идентификатор ресурса ARM назначенного пользователем идентификатора. |
Конфигурация контейнера
Конфигурация для пулов с включенными контейнерами.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
containerImageNames | Коллекция имен образов контейнеров. | |
containerRegistries | Дополнительные частные реестры, из которых можно извлекать контейнеры. | |
тип | Используемая контейнерная технология. |
Реестр контейнеров
Частный реестр контейнеров.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
identityReference | Ссылка на назначенное пользователем удостоверение для использования для доступа к реестру контейнеров Azure вместо имени пользователя и пароля. | |
пароль | Пароль для входа на сервер реестра. | |
RegistryServer | URL-адрес реестра. | |
имя пользователя | Имя пользователя для входа на сервер реестра. |
Тип контейнера
Используемая контейнерная технология.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
dockerCompatible | Для запуска контейнеров будет использоваться Docker-совместимая контейнерная технология. |
ContainerWorkingDirectory
Расположение рабочего каталога задачи контейнера.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
containerImageDefault | Используйте рабочий каталог, определенный в контейнере Image. Помните, что этот каталог не будет содержать файлы ресурсов, загруженные пакетной службой. | |
taskWorkingDirectory | Используйте стандартный рабочий каталог задач пакетной службы, который будет содержать файлы ресурсов задачи, заполненные пакетной службой. |
DataDisk
Параметры, которые будут использоваться дисками данных, связанными с вычислительными узлами в пуле. При использовании подключенных дисков с данными вам необходимо смонтировать и отформатировать диски из виртуальной машины, чтобы использовать их.
Размещение DiffDisk
Задает временное размещение диска операционной системы для всех вычислительных узлов (ВМ) в пуле.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
CacheDisk | Эфемерный диск ОС хранится в кэше виртуальной машины. |
DiffDiskSettings
Задает временные параметры диска для диска операционной системы, используемого вычислительным узлом (ВМ).
DiskEncryptionConfiguration
Конфигурация шифрования диска, примененная к вычислительным узлам в пуле. Конфигурация шифрования диска не поддерживается в пуле Linux, созданном с помощью Shared Image Gallery Image.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
цели | Список целевых дисков. Пакетная служба зашифрует на вычислительном узле. |
DynamicVNetAssignmentScope
Объем динамического назначения vnet.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
работа | Динамическое назначение виртуальной сети выполняется для каждого задания. | |
никто | Не включено динамическое назначение виртуальной сети. |
Уровень
Повышенный уровень пользователя.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
админ | Пользователь является пользователем с повышенными правами доступа и работает с полными правами администратора. | |
неадмин | Пользователь является стандартным пользователем без повышенных прав доступа. |
EnvironmentSetting
Переменная среды, которая должна быть установлена в процессе задачи.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
имя | Имя переменной среды. | |
ценить | Значение переменной среды. |
Сообщение об ошибке
В ответе об ошибке пакетной службы Azure получено сообщение об ошибке.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
язык | Код языка сообщения об ошибке | |
ценить | Текст сообщения. |
ImageReference
Ссылка на образ из Marketplace виртуальных машин Azure или общий образ галереи изображений.Чтобы получить список всех ссылок на образы Azure Marketplace, проверенные пакетной службой Azure, см. Операцию «Список поддерживаемых образов».
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
точная версия | Конкретная версия образа платформы или образа торговой площадки, использованная для создания узла. Это доступное только для чтения поле отличается от «версия» только в том случае, если значение, указанное для «версии» при создании пула, было «последним». | |
предложение | Тип предложения образа рынка виртуальных машин Azure. | |
издатель | Издатель образа рынка виртуальных машин Azure. | |
sku | Артикул образа рынка виртуальных машин Azure. | |
версия | Версия образа Marketplace виртуальных машин Azure. | |
virtualMachineImageId | Идентификатор ресурса ARM для изображения совместно используемой галереи изображений. Вычислительные узлы в пуле будут созданы с использованием этого идентификатора изображения.Это имеет форму /subscriptions/{subscriptionId}/resourceGroups/{resourceGroup}/providers/Microsoft.Compute/galleries/{galleryName}/images/{imageDefinitionName}/versions/{VersionId} или / subscriptions / {subscriptionId} / resourceGroups. /{resourceGroup}/providers/Microsoft.Compute/galleries/{galleryName}/images/{imageDefinitionName}, чтобы по умолчанию всегда использовалась последняя версия образа. |
Протокол входящей конечной точки
Протокол конечной точки.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
TCP | Используйте TCP для конечной точки. | |
udp | Используйте UDP для конечной точки. |
InboundNATPool
Входящий пул NAT, который может использоваться для внешней адресации определенных портов на вычислительных узлах в пуле пакетов.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
backendPort | Номер порта на вычислительном узле. | |
frontendPortRangeEnd | Последний номер порта в диапазоне внешних портов, который будет использоваться для предоставления входящего доступа к backendPort на отдельных вычислительных узлах. | |
frontendPortRangeStart | Первый номер порта в диапазоне внешних портов, который будет использоваться для предоставления входящего доступа к backendPort на отдельных вычислительных узлах. | |
имя | Имя конечной точки. | |
networkSecurityGroupRules | Список правил группы безопасности сети, которые будут применены к конечной точке. | |
протокол | Протокол конечной точки. |
IPAddressProvisioningType
Тип предоставления общедоступных IP-адресов для пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
пакетный | Общедоступный IP-адрес будет создан и управляться пакетной службой.В зависимости от размера пула может быть несколько общедоступных IP-адресов. | |
nopublicipaddresses | Общедоступный IP-адрес не создается. | |
управляемый пользователем | общедоступных IP-адреса предоставляются пользователем и будут использоваться для предоставления вычислительных узлов. |
LinuxUserConfiguration
Свойства, используемые для создания учетной записи пользователя на вычислительном узле Linux.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
гид | Идентификатор группы для учетной записи пользователя. | |
sshPrivateKey | Закрытый ключ SSH для учетной записи пользователя. | |
uid | Идентификатор пользователя учетной записи пользователя. |
LoginMode
Режим входа для пользователя
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
партия | Режим входа в систему LOGON32_LOGON_BATCH Win32. Пакетный режим входа рекомендуется для длительных параллельных процессов. | |
интерактивный | Режим входа в систему LOGON32_LOGON_INTERACTIVE Win32. UAC включен в пулах конфигурации Windows VirtualMachine. Если этот параметр используется с повышенным удостоверением пользователя в пуле Windows VirtualMachineConfiguration Pool, сеанс пользователя не будет повышен, если приложение, выполняемое из командной строки задачи, не настроено так, чтобы всегда требовать административные привилегии или всегда требовать максимальные привилегии. |
Элемент метаданных
Пара имя-значение, связанная с ресурсом пакетной службы.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
имя | Имя элемента метаданных. | |
ценить | Значение элемента метаданных. |
MountConfiguration
Файловая система для монтирования на каждом узле.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
azureBlobFileSystemConfiguration | Контейнер хранения Azure для подключения с помощью BLOB-объекта FUSE на каждом узле. | |
azureFileShareConfiguration | Файловый ресурс Azure для подключения к каждому узлу. | |
cifsMountConfiguration | Файловая система CIFS / SMB для монтирования на каждом узле. | |
nfsMountConfiguration | Файловая система NFS для монтирования на каждом узле. |
ИмяЗначение Пара
Представляет пару «имя-значение».
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
имя | Имя в паре «имя-значение». | |
ценить | Значение в паре «имя-значение». |
Конфигурация сети
Конфигурация сети для пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
dynamicVNetAssignmentScope | Объем динамического назначения vnet. | |
endpointConfiguration | Конфигурация конечных точек на вычислительных узлах в пуле пакетов. | |
publicIPAddressConfiguration | Конфигурация общедоступного IP-адреса для вычислительных узлов в пуле пакетов. Свойство конфигурации общедоступного IP-адреса | |
subnetId | Идентификатор ресурса ARM подсети виртуальной сети, к которой будут присоединены вычислительные узлы пула.Это форма / подписки / {подписка} / группы ресурсов / {группа} / поставщики / {поставщик} / виртуальные сети / {сеть} / подсети / {подсеть}. |
NetworkSecurityGroupRule
Правило группы безопасности сети, применяемое к входящей конечной точке.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
доступ | Действие, которое необходимо выполнить для указанного IP-адреса, диапазона подсети или тега. | |
приоритет | Приоритет этого правила. | |
sourceAddressPrefix | Префикс или тег адреса источника, соответствующий правилу. | |
sourcePortRanges | Диапазон исходных портов, соответствующих правилу. |
NetworkSecurityGroupRuleAccess
Действие, которое необходимо выполнить для указанного IP-адреса, диапазона подсети или тега.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
разрешать | Разрешить доступ. | |
Отрицать | Запретить доступ. |
NFSMountConfiguration
Информация, используемая для подключения к файловой системе NFS.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
mountOptions | Дополнительные параметры командной строки для передачи команде монтирования. | |
relativeMountPath | Относительный путь на вычислительном узле, где будет смонтирована файловая система. | |
источник | URI монтируемой файловой системы. |
Конфигурация размещения узла
Конфигурация размещения узла для пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
политика | Размещение узла Тип политики для пакетных пулов. |
NodePlacementPolicyType
Политика размещения для распределения узлов в пуле.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
региональный | Все узлы в пуле будут размещены в одном регионе. | |
зональный | узлов в пуле будут распределены по разным зонам доступности с оптимальной балансировкой. |
OSDisk
Параметры для диска операционной системы вычислительного узла (ВМ).
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
ephemeralOSDiskSettings | Задает временные параметры диска для диска операционной системы, используемого вычислительным узлом (ВМ). |
Конфигурация конечной точки пула
Конфигурация конечной точки для пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
inboundNATPools | Список входящих пулов NAT, которые могут использоваться для внешней адресации определенных портов на отдельном вычислительном узле. |
PoolIdentityType
Идентификатор пула пакетов, если он настроен.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
Никто | Пакетный пул не имеет связанного с ним идентификатора. Установка | |
UserAssigned | Пакетный пул имеет назначенные пользователем идентификаторы. |
PoolState
Текущее состояние пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
активный | Пул доступен для выполнения задач при наличии вычислительных узлов. | |
удаление | Пользователь запросил удаление пула, но операция удаления еще не завершена. |
Статистика пула
Содержит статистику использования и использования ресурсов за время существования пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
lastUpdateTime | Время последнего обновления статистики. Вся статистика ограничена диапазоном между startTime и lastUpdateTime. | |
resourceStats | Статистика, связанная с потреблением ресурсов вычислительными узлами в пуле. | |
начальное время | Время начала временного диапазона, охватываемого статистикой. | |
url | URL-адрес статистики. | |
usageStats | Статистика, относящаяся к использованию пула, например, количество используемого основного времени. |
PublicIPAddressConfiguration
Конфигурация общедоступного IP-адреса сетевой конфигурации пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
ipAddressIds | Список общедоступных IP-адресов, которые пакетная служба будет использовать при инициализации вычислительных узлов. | |
обеспечение | Тип предоставления общедоступных IP-адресов для пула. |
Ошибка изменения размера
Ошибка при изменении размера пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
код | Идентификатор ошибки изменения размера пула.Коды инвариантны и предназначены для программного использования. | |
сообщение | Сообщение об ошибке изменения размера пула, предназначенное для отображения в пользовательском интерфейсе. | |
ценности | Список дополнительных сведений об ошибке, связанной с ошибкой изменения размера пула. |
ResourceFile
Один или несколько файлов для загрузки на вычислительный узел.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
autoStorageContainerName | Имя контейнера хранения в Учетной записи автоматического хранения. | |
blobPrefix | Префикс большого двоичного объекта, используемый при загрузке больших двоичных объектов из контейнера хранилища Azure.Будут загружены только большие двоичные объекты, имена которых начинаются с указанного префикса. | |
fileMode | Атрибут режима разрешения файла в восьмеричном формате. | |
Путь файла | Расположение на вычислительном узле, куда загружаются файлы, относительно рабочего каталога Задачи. | |
httpUrl | URL-адрес файла для загрузки. | |
identityReference | Ссылка на назначенное пользователем удостоверение для использования для доступа к хранилищу BLOB-объектов Azure, указанное с помощью storageContainerUrl или httpUrl | |
storageContainerUrl | URL-адрес контейнера больших двоичных объектов в хранилище больших двоичных объектов Azure. |
Статистика ресурсов
Статистика, связанная с потреблением ресурсов вычислительными узлами в пуле.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
avgCPUPercentage | Среднее использование ЦП на всех вычислительных узлах в пуле (в процентах на узел). | |
avgDiskGiB | Среднее используемое дисковое пространство в ГиБ на всех вычислительных узлах в пуле. | |
avgMemoryGiB | Среднее использование памяти в ГиБ на всех вычислительных узлах в пуле. | |
diskReadGiB | Общий объем данных в ГиБ, прочитанных с диска на всех вычислительных узлах в пуле. | |
diskReadIOps | Общее количество операций чтения с диска на всех вычислительных узлах в пуле. | |
diskWriteGiB | Общий объем данных в ГиБ, записанных на диск для всех вычислительных узлов в пуле. | |
diskWriteIOps | Общее количество операций записи на диск для всех вычислительных узлов в пуле. | |
lastUpdateTime | Время последнего обновления статистики.Вся статистика ограничена диапазоном между startTime и lastUpdateTime. | |
networkReadGiB | Общий объем данных в ГиБ, прочитанных по сети на всех вычислительных узлах в пуле. | |
networkWriteGiB | Общий объем данных в ГиБ, записанных в сети на всех вычислительных узлах в пуле. | |
peakDiskGiB | Пиковое значение используемого дискового пространства в ГиБ на всех вычислительных узлах в пуле. | |
пикMemoryGiB | Пиковое использование памяти в ГиБ на всех вычислительных узлах в пуле. | |
начальное время | Время начала временного диапазона, охватываемого статистикой. |
StartTask
Задача, которая запускается, когда узел присоединяется к пулу в пакетной службе Azure или когда вычислительный узел перезагружается или повторно создается.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
командная строка | Командная строка StartTask. | |
containerSettings | Параметры контейнера, под которым запускается StartTask. | |
environmentSettings | Список настроек переменных среды для StartTask. | |
maxTaskRetryCount | Максимальное количество повторных попыток Задачи. | |
resourceFiles | Список файлов, которые пакетная служба загрузит на вычислительный узел перед запуском командной строки.Список файлов ресурсов имеет максимальный размер. Когда максимальный размер превышен, запрос не будет выполнен, и код ошибки ответа будет RequestEntityTooLarge. В этом случае необходимо уменьшить размер коллекции ResourceFiles. Этого можно добиться с помощью файлов .zip, пакетов приложений или контейнеров Docker. | |
userIdentity | Идентификатор пользователя, под которым запускается StartTask. | |
waitForSuccess | Указывает, должна ли пакетная служба ждать успешного завершения StartTask (то есть выхода с кодом выхода 0) перед планированием любых задач на вычислительном узле. |
StorageAccountType
Тип учетной записи хранения для использования при создании дисков с данными.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
premium_lrs | Диск данных должен использовать локально избыточное хранилище премиум-класса. | |
standard_lrs | Диск данных должен использовать стандартное локально избыточное хранилище. |
TaskContainerSettings
Параметры контейнера для Задачи.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
containerRunOptions | Дополнительные параметры для команды создания контейнера. | |
imageName | Образ, который будет использоваться для создания контейнера, в котором будет выполняться задача. | |
реестр | Частный реестр, содержащий образ контейнера. | |
рабочий каталог | Расположение рабочего каталога задачи контейнера. |
TaskSchedulingPolicy
Определяет, как задачи должны распределяться по вычислительным узлам.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
nodeFillType | Как задачи распределяются по вычислительным узлам в пуле. |
Статистика использования
Статистика, относящаяся к информации об использовании пула.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
посвященныйCoreTime | Суммарное время настенных часов выделенных ядер вычислительных узлов, являющихся частью пула. | |
lastUpdateTime | Время последнего обновления статистики. Вся статистика ограничена диапазоном между startTime и lastUpdateTime. | |
начальное время | Время начала временного диапазона, охватываемого статистикой. |
UserAccount
Свойства, используемые для создания пользователя, используемого для выполнения задач на узле пакетных вычислений Azure.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
высотаLevel | Уровень повышения учетной записи пользователя. | |
linuxUserConfiguration | Специфическая для Linux конфигурация пользователя для учетной записи пользователя. | |
имя | Имя учетной записи пользователя. | |
пароль | Пароль учетной записи пользователя. | |
windowsUserConfiguration | Конфигурация пользователя для конкретной учетной записи Windows. |
UserAssignedIdentity
Пользователь присвоил идентификатор
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
ID клиента | Идентификатор клиента назначенного пользователем идентификатора. | |
PrincipalId | Основной идентификатор пользователя, назначенного идентификатором. | |
resourceId | Идентификатор ресурса ARM назначенного пользователем идентификатора |
Идентификатор пользователя
Определение идентификатора пользователя, под которым запускается Задача.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
autoUser | Автоматический пользователь, под которым запускается Задача. | |
имя пользователя | Имя идентификатора пользователя, под которым запускается Задача. |
Конфигурация виртуальной машины
Конфигурация для вычислительных узлов в пуле на основе инфраструктуры виртуальных машин Azure.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
containerConfiguration | Конфигурация контейнера для пула. | |
dataDisks | Конфигурация дисков данных, подключенных к вычислительным узлам в пуле. | |
diskEncryptionConfiguration | Конфигурация шифрования диска для пула. | |
расширения | Расширение виртуальной машины для пула. | |
imageReference | Ссылка на образ из Marketplace виртуальных машин Azure или настраиваемый образ виртуальной машины для использования. | |
тип лицензии | Тип локальной лицензии, которая будет использоваться при развертывании операционной системы. Windows_Server — локальная лицензия для Windows Server. Windows_Client — локальная лицензия для клиента Windows. | |
nodeAgentSKUId | Артикул агента пакетного вычислительного узла, который должен быть подготовлен на вычислительных узлах в пуле. | |
nodePlacementConfiguration | Конфигурация размещения узла для пула. | |
osDisk | Параметры для диска операционной системы виртуальной машины. | |
windowsConfiguration | Параметры операционной системы Windows на виртуальной машине. |
VMExtension
Конфигурация для расширений виртуальной машины.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
autoUpgradeMinorVersion | Указывает, должно ли расширение использовать более новую вспомогательную версию, если она доступна во время развертывания. Однако после развертывания расширение не будет обновлять второстепенные версии до повторного развертывания, даже если для этого свойства установлено значение true. | |
имя | Имя расширения виртуальной машины. | |
protectedSettings | Расширение может содержать или protectedSettings, или protectedSettingsFromKeyVault, или вообще не содержать защищенных настроек. | |
ProvisionAfterExtensions | Коллекция имён расширений. | |
издатель | Имя издателя обработчика расширений. | |
настройки | Общедоступные настройки расширения в формате JSON. | |
тип | Тип расширения. | |
typeHandlerVersion | Версия обработчика скрипта. |
Конфигурация Windows
Параметры операционной системы Windows, применяемые к виртуальной машине.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
enableAutomaticUpdates | Включено ли автоматическое обновление на виртуальной машине. |
WindowsUserConfiguration
Свойства, используемые для создания учетной записи пользователя на вычислительном узле Windows.
Имя | Тип | Описание |
---|---|---|
loginMode | Режим входа в систему для пользователя |
Аренда на отпуск Флорида-Кис Дом | Марафон
Приезжайте к нам в Марафон, Флорида, , в самом сердце Флорида-Кис, ! Город Марафон расположен в центре цепи островов Флорида-Кис — всего в часе езды от Ки-Уэста и Ки-Ларго.Эта коллекция ключей предлагает пляжи с белым песком и прекрасную теплую погоду для полного расслабления. Наши апартаменты для аренды на время Марафона расположены всего в нескольких минутах от лучших достопримечательностей города — во многих даже есть частные доки, бассейны и виды на залив!
Специалисты компании Island Breeze Vacation Rentals помогут вам найти идеальный дом, виллу или кондоминиум для аренды на время отпуска. Независимо от размера или состава вашей группы, у нас есть арендуемая недвижимость для удовлетворения всех ваших потребностей и желаний в любом ценовом диапазоне.Мы предлагаем еженедельную аренду на время отпуска, ежемесячную аренду на время отпуска и сезонную аренду. Планируете взять с собой собаку? У нас есть великолепные дома для домашних животных во Флорида-Кис, где вы и ваша семья можете наслаждаться вместе со своим пушистым другом!В
Island Breeze Vacation Rentals есть менеджер по аренде, доступный вам 24 часа в сутки, каждый день. Если с арендой вашей недвижимости что-то случится неожиданно, мы минимизируем ее влияние на ваш отпуск. Наша цель состоит в том, чтобы вы смогли насладиться отпуском на всю жизнь и продолжать посещать наши дома для отпуска во Флорида-Кис снова и снова на долгие годы.
- Аренда на отпуск Флорида-Кис
- Marathon, Флорида Аренда на отпуск
- Ки-Колони-Бич, Флорида дома для отпуска
- Флорида-Кис Аренда жилья для отпуска
- Флорида-Кис Аренда жилья для отпуска с доком
- Флорида-Кис Аренда на отпуск с частным бассейном
- Дом, где разрешено размещение с домашними животными, Флорида-Кис
Развлечения в Флорида-Кис
Ваш отпуск во Флорида-Кис — наш приоритет номер один в Island Breeze Florida Keys Vacation Rentals! Мы гордимся личным вниманием, которое уделяем нашим гостям и владельцам.Наша команда экспертов по аренде на время отпуска знает Флорида-Кис не хуже местных жителей. Мы проведем вас к лучшим достопримечательностям Марафона и Ки-Колони-Бич во Флориде, включая рестораны, магазины, рыбалку, подводное плавание с аквалангом, сноркелинг и многое другое, что можно сделать во Флорида-Кис.
Проведите дни, лежа на одном из пляжей района Марафона, например, на знаменитом пляже Сомбреро или потрясающем пляже Баия-Хонда, государственном парке и мосте. Через несколько минут после сдачи в аренду вы найдете одни из лучших возможностей окунуться в Атлантический океан.В Марафоне вы можете поплавать с дельфинами в Центре исследования дельфинов или посетить нашу уникальную некоммерческую больницу для черепах. Совершите однодневную поездку в Ки-Уэст и займитесь сноркелингом в знаменитом национальном парке Драй Тортугас или посетите Исламораду и посмотрите шоу водных организмов в Театре моря. Во время пребывания в самом центре Флорида-Кис все находится всего в нескольких минутах езды.
Правила пулаЧтобы обезопасить себя в бассейне этим летом, важно все должны следовать этим правилам:
Главный пул
Детский бассейн
Доска для дайвинга
Площадь переулок:
Водная горка
Зона концессии
|
Подставки для киев | Home Leisure Direct
Подставки для кия незаменимы во время дальних ударов, независимо от того, играете ли вы в английский пул, американский пул или снукер, и мы предлагаем большой выбор подставок от ведущих производителей. Все наши остатки — высочайшего профессионального качества.
Для всех, кто играет в снукер, а также для тех игроков в пул, которым не хватает досягаемости, перерывы являются необходимостью для достижения этих дальних ударов. Мы предлагаем широкий выбор опорных головок, включая крестовины и крестовины, а также сопутствующие валы.У нас даже есть телескопические упоры для очень дальних выстрелов.
Для большинства ударов будет достаточно стандартной крестовины, но иногда требуется голова паука, особенно когда вы пытаетесь дотянуться до других шаров на вашем пути. С нашим выбором опор у вас всегда будет подходящий инструмент для идеального снимка. Остальные головки, которые мы поставляем, имеют предварительную резьбу, что означает, что вы можете легко навинтить их на оставшуюся палку по вашему выбору без помощи каких-либо инструментов.
Если вам нужен совет о том, какой отдых лучше всего соответствует вашим потребностям, позвоните в нашу группу экспертов по продажам по телефону 0800 622 6464 , и мы поможем вам решить, какой отдых лучше всего соответствует вашим потребностям.
Все наши кии доставляются бесплатно на материковую часть Великобритании. Однако для местоположений за пределами континентальной части Великобритании может взиматься дополнительная плата в зависимости от вашего точного местоположения. Пожалуйста, позвоните в нашу дружную службу поддержки клиентов по телефону 0800 622 6464 , чтобы узнать расценки.
У нас в наличии только лучшие кийи от ведущих производителей. Все наши подставки для кий изготавливаются лучшими в отрасли, поэтому, покупая подставки в Home Leisure Direct, вы знаете, что получаете высококачественный продукт.
Посетите наш выставочный зал для бильярдных столов, чтобы посмотреть на превосходную коллекцию подставок для кий, опробовать их и получить из первых рук совет по выбору подходящего для вас. Наш дружелюбный персонал всегда готов помочь вам найти идеальные кии для бассейна и другие аксессуары.
Если вы ищете новый кий к своему новому отдыху, у нас в наличии более 150 киев как в американском, так и в английском стилях. В нашем выставочном зале вы можете опробовать нашу коллекцию на любом из огромного количества игровых столов.У нас также есть опоры и надставки. Если вам нужна конкретная реплика, позвоните нам по телефону 0800 622 6464 или 01454 413636 перед поездкой, так как наш ассортимент меняется ежедневно.
Если вы ищете другие аксессуары для бассейна, мы также предлагаем большой ассортимент, например, опрокидывающие инструменты, очиститель вала, футляры для киев и стойки для киев, все из которых можно увидеть на нашей странице аксессуаров для бильярдных столов. Home Leisure Direct может предоставить вам все необходимое для ухода за оборудованием для бассейна, не говоря уже о столах, на которых можно играть.
Если у вас есть какие-либо вопросы о каких-либо подставках для кия, которые мы продаем, или о любых других наших продуктах, позвоните нам по телефону 0800 622 6464 или 01454 413636 , и один из наших дружелюбных советников будет рад помочь тебе.
Пул везикул в состоянии покоя отвечает за спонтанное слияние пузырьков в синапсе
Abstract
Синапсы передают информацию посредством высвобождения нейротрансмиттеров, хранящихся в пресинаптических везикулах. Идентичность, кинетика и расположение пулов везикул, мобилизованных нейрональной активностью, были изучены с использованием различных методов.Здесь мы описываем новый генетически кодируемый зонд biosyn, который состоит из биотинилированного VAMP-2, экспрессируемого на пресинаптических окончаниях. Мы используем высокоаффинное взаимодействие между стрептавидином и биотином, чтобы пометить биосин флуоресцентным стрептавидином во время слияния везикул. Этот подход позволяет маркировать везикулы последовательно, чтобы визуализировать и установить идентичность пресинаптических пулов. Используя эту технику, мы смогли различить два разных пула везикул в нейронах гиппокампа крысы: один, который высвобождается в ответ на пресинаптическую активность, и другой, отдельный пул везикул, который спонтанно сливается с плазматической мембраной.Мы также установили, что спонтанные везикулы принадлежат «пулу покоя», который обычно не мобилизуется нейрональной активностью и функция которого в основном неизвестна.
Введение
Передача информации в синапсе требует высвобождения нейромедиатора из пресинаптического терминала и последующей активации постсинаптических рецепторов. Все синапсы демонстрируют как вызванные (кальций-зависимые), так и спонтанные (кальций-независимые) формы высвобождения нейромедиаторов 1 .Вызванное высвобождение тесно связано с потенциалом действия и генерирует постсинаптический ответ с задержкой менее миллисекунды 2 . В состоянии покоя, при отсутствии какой-либо активности, механизм, ответственный за слияние везикул, заполненных нейротрансмиттерами, в синапсе имеет очень низкую вероятность высвобождения, но не равна нулю. В результате события спонтанного слияния происходят случайным образом, но с очень низкой скоростью, по оценкам, примерно 1-2 пузырька в минуту 3 , 4 .Консенсусное мнение состоит в том, что деполяризация мембраны (за счет потенциалов действия или иным образом) увеличивает вероятность слияния пузырьков, позволяя синапсу переключаться с незначительной скорости спонтанного высвобождения на быструю синхронизированную форму высвобождения. Недавно начались дебаты относительно происхождения каждого режима выпуска 5 , 6 . Везикулы, которые высвобождают нейромедиатор, спонтанно вытягиваются из того же пула, что и везикулы, высвобождающиеся в ответ на нейронную активность? В связи с этим вопросом, является ли спонтанное (или конститутивное) высвобождение важной особенностью синаптической передачи? Эти основные, но нерешенные вопросы имеют решающее значение для понимания передачи информации в синапсе и проверки некоторых основных предположений квантовой теории 1 .Чтобы расширить наши знания в этой области, важно сначала установить идентичность пулов пресинаптических везикул и понять, как они мобилизуются в терминале.
Пресинаптические везикулы, заполненные нейротрансмиттерами, организованы в отдельные пулы с разной кинетикой высвобождения и субклеточной локализацией 7 . В общем, считается, что везикулы разделены на три основных пула: быстро высвобождаемый пул (RRP), резервный пул и резервный пул. Размеры каждого пула, их расположение в синапсе, а также способы их мобилизации все еще остаются предметом обсуждения 7 .Обычно считается, что RRP составляют те пузырьки, которые находятся ближе всего к плазматической мембране, состыкованы в активной зоне и готовы к немедленному высвобождению 8 . Резервный пул служит для пополнения пустых участков высвобождения в RRP и действует как источник пузырьков, которые бутон может использовать для продолжения высвобождения нейромедиатора после того, как RRP был израсходован. Эти два пула вместе известны как рециклирующий пул и мобилизуются за счет деполяризации мембраны кальций-зависимым образом.Наконец, есть группа везикул, известная как «пул покоя», которые не поддаются высвобождению в ответ на электрическую активность 3 , 9 . Функция этого пула пузырьков осталась в основном неизвестной 10 .
Спонтанные события, известные как миниатюрные постсинаптические события или мини, представляют собой постсинаптические меры, которые отражают высвобождение нейромедиатора, высвобождаемого из одиночного пузырька (или кванта), и были использованы для формулировки квантовой теории высвобождения нейротрансмиттера 1 .С пресинаптической точки зрения красители, которые маркируют мембраны, такие как FM1-43, показали, что спонтанный экзо- и эндоцитоз везикул также происходят в синапсе, и пришли к выводу, что эти события соответствуют постсинаптическому мини 3 , 11 . Одно широко распространенное предположение состоит в том, что пузырьки, претерпевающие как спонтанное, так и зависимое от активности слияние, используют один и тот же набор пузырьков и один и тот же механизм слияния. Более поздние исследования показали, что эти два режима выпуска могут быть получены из разных пулов 5 , 12 .На сегодняшний день противоречивые отчеты содержат доказательства как за, так и против двух отдельных пулов пузырьков, оставляя вопрос нерешенным 6 , 11 . Здесь мы разрабатываем и внедряем новую технику маркировки пузырьков в живых нейронах. Используя этот метод, мы показываем существование двух независимых пулов везикул: один, который спонтанно сливается с плазматической мембраной, а другой может быть мобилизован только с помощью нейрональной активности. Кроме того, мы использовали пресинаптический зонд синаптофизин-pHluorin (sypHy), чтобы установить идентичность пула спонтанных везикул.Мы обнаружили, что спонтанно высвобождаемые везикулы мобилизуются из «пула покоя», который первоначально был описан как независимый от активности набор везикул, которые не участвуют в круговороте везикул. Наши данные не только предоставляют дополнительные доказательства существования функционально гетерогенной популяции пузырьков в пресинаптических окончаниях, но также устанавливают роль ранее плохо определенного пула покоя.
Результаты
Биосин: новый инструмент для мечения белков пресинаптических везикул
Мы разработали метод мечения белков пресинаптических везикул путем комбинирования in vivo биотинилирования трансмембранных белков вместе с необратимым мечением флуоресцентным стрептавидином.Наш подход представляет собой адаптацию ранее описанного инструмента, используемого для маркировки поверхностных антител и других трансмембранных белков 13 , включая постсинаптические рецепторы 14 (). Мы создали гибридный белок между белком пресинаптических везикул, VAMP2, и пептидом-акцептором биотина (BAP), который специфически распознается ферментом биотинлигазы BirA . Домен ВАР был слит с просветным концом (С-концом) VAMP2, который топологически эквивалентен внеклеточному домену.Мы использовали сконструированную версию фермента BirA , который локализуется в просвете эндоплазматической сети посредством сигнала, который перемещает белки в секреторный путь 13 . Совместная экспрессия VAMP-2-BAP и BirA приводит к образованию люминального биотинилированного VAMP-2, который мы назвали «биосин». Флуоресцентно меченый стрептавидин может впоследствии использоваться для необратимого связывания биосина и флуоресцентной метки вновь экзоцитозированных везикул на пресинаптических окончаниях (2).
Визуализация везикул, высвобождаемых деполяризацией мембраны, с использованием biosyn( a ) Диаграмма, показывающая мечение биосина стрептавидином.Сначала нейроны предварительно обрабатывают стрептавидином Alexa647 (strep647, показан синим) для подавления поверхностного VAMP2. Избыток стрептавидина удаляется промыванием. Затем нейроны стимулируются в присутствии стрептавидина Alexa555 (strep555, показаны красным), чтобы маркировать везикулы, которые сливаются с плазматической мембраной во время высвобождения нейромедиатора, и выставляют свои внутрипросветные молекулы биосина во внеклеточное пространство. ( b ) Схематическая диаграмма, показывающая график экспериментального протокола.Поверхностный биосин окрашивали strep647 (синяя полоса) в течение 30 секунд, промывали, а затем нейроны дважды стимулировали раствором с высоким содержанием K + в присутствии strep555 (красная полоса; 5-минутный интервал между деполяризациями). После промывки нейроны фиксировали и отображали. ( c ) Нейроны гиппокампа были котрансфицированы биозином и синаптофизин-pHлуорином (SypHy). Изображения показывают совместную локализацию отдельных синапсов, экспрессирующих SypHy (зеленый), с рециркулирующим пулом везикул, меченных strep555 (красный), и поверхностных меток с помощью strep647 (синий).Масштабная линейка = 10 мкм. ( d ) График, показывающий график интенсивности флуоресценции синапсов, меченных деполяризацией, в зависимости от поверхностной метки. Индивидуальные синапсы показаны серым, а значения сгруппированных значений (группы по 10) — черным (n = 445 синапсов из 20 ячеек). ( и ) Количественная оценка окрашивания биосина в различных условиях. Высокая стимуляция K + специфически маркирует зависимый от активности пул, когда присутствует кальций. Все условия были нормализованы к этому значению.Окрашивание отменяется при отсутствии кальция или при наличии кадмия (блокатора кальциевых каналов) (n> 200 синапсов из 10 клеток на одно состояние). Значения показаны как среднее ± SEM.
Биосин маркирует везикулы, высвобождаемые пресинаптической активностью
Сначала мы решили установить, можем ли мы пометить биосин флуоресцентным стрептавидином в живых пресинаптических окончаниях (). Нейроны, экспрессирующие Vamp2-BAP, BirA и пресинаптический репортер на основе EGFP синаптофизин-pHluorin (sypHy; зеленая точка in) 15 , инкубировали в нормальном HBS, содержащем стрептавидин-alexa647 (strep647), для маркировки всех биологических объектов плазмы. мембрана (показана синей точкой внутри).После смывания strep647 нейроны стимулировали раствором с высоким содержанием калия (см. Методы), содержащим стрептавидин-alexa555 (strep555), чтобы пометить все вновь подвергшиеся экзоцитозу везикулы из рециркулирующего пула (красная точка внутри). Полученные точки соответствуют скоплениям везикул, высвобождаемых на пресинаптических окончаниях, которые локализуются совместно с пресинаптическим маркером sypHy (зеленый). Специфичность этого метода была дополнительно установлена путем проведения экспериментов в условиях, которые не должны приводить к циклическому изменению везикул, таких как деполяризация в отсутствие кальция или в присутствии кадмия (мощный блокатор кальциевых каналов).В этих условиях наблюдалось очень слабое окрашивание (окрашивание не полностью отсутствовало из-за некоторых событий спонтанного слияния везикул, описанных ниже), что указывает на то, что методика может специфически маркировать события слияния везикул, зависящие от активности (). Мы также установили, что нейроны, экспрессирующие только BirA или только VAMP2-BAP, не проявляли окрашивания флуоресцентным стрептавидином после стимуляции высоким содержанием калия (дополнительный рисунок 1). Наконец, только аксоны, экспрессирующие биосин, были помечены флуоресцентным стрептавидином; все соседние нетрансфицированные аксоны не показали флуоресцентного окрашивания, что исключает какое-либо неспецифическое связывание стрептавидином.Известно, что присутствующий на поверхности ВАМП-2 смешивается с везикулярным ВАМП-2 после экзоцитоза. В соответствии с этим мы обнаружили, что размер рециклирующего пула положительно коррелировал с поверхностной долей VAMP-2 в состоянии покоя (; коэффициент корреляции R = 0,55, p <0,05).
Затем мы установили, можем ли мы пометить пузырьки, высвобождаемые в ответ на потенциалы действия (). Нейроны, экспрессирующие как sypHy, так и биосин, сильно стимулировались (900 AP при 20 Гц) для мобилизации всего рециклирующего пула везикул ().SypHy — это чувствительный репортер пресинаптического цикла везикул, состоящий из слитого белка между синаптопгизином и pH-чувствительным EGFP, pHluorin, который подавляется внутри кислого просвета везикулы 15 , 16 . После слияния везикул молекула флюорина увеличивает свою флуоресценцию, поскольку она контактирует с основным внеклеточным pH. В результате этот зонд обеспечивает чувствительные средства оценки степени экзоцитоза, который происходит во время протокола стимуляции. Мы использовали метод щелочного улавливания, который использует свойства бафиломицина (специфического блокатора везикулярного протонного насоса) для отмены повторного подкисления везикул после эндоцитоза, что приводит к кумулятивному увеличению сигналов флуоресценции sypHy, которые напрямую соответствуют количеству экзоцитозированных везикул 17 .Мы измерили флуоресценцию sypHy (зеленый канал) во время окрашивания, когда Strep594 присутствовал во внеклеточной среде (). Мы обнаружили линейную корреляцию между изменением флуоресценции, измеренной с помощью sypHy (амплитуда ΔF), и интенсивностью флуоресценции strep594 в отдельных синапсах (; коэффициент корреляции R = 0,81, p <0,05). Наши результаты ясно показывают, что biosyn достоверно сообщает о событиях слияния пузырьков и может использоваться для установления размера пулов пузырьков на пресинаптических окончаниях.Наконец, было важно установить, оказывает ли мечение биосина стрептавидином какое-либо влияние на последующий экзо / эндоцитоз везикул. Две линии доказательств предполагают, что меченые синапсы ведут себя нормально: 1- синапсы, в которых весь рециклирующий пул был окрашен streps488, затем можно было восстановить с помощью FM4-64 (дополнительный рис. 2), а 2- нейроны, котрансфицированные sypHy и биосин, показали аналогичные Ответы sypHy до и после окрашивания Strep594 (дополнительный рисунок 3). Вместе наши данные показывают, что биосин является надежным зондом для мечения экзоцитозированных пузырьков в пресинаптических окончаниях.
Биосин, используемый в качестве надежного инструмента для оценки вызванного слияния везикул.Нейроны гиппокампа были котрансфицированы биосином и sypHy. ( a ) Схематическая диаграмма, показывающая временную шкалу экспериментального протокола: нейроны стимулировали 900 AP при 20 Гц в присутствии strep555 для метки биосина, при этом измеряя количество экзоцитоза, о котором сообщает синаптофизин-pHluorin (sypHy) в зеленом канал. ( b ) Изображения показывают флуоресценцию sypHy до и сразу после стимула.( c ) Ответы на 900 AP при 20 Гц (черная полоса), измеренные для всех анализируемых синапсов из одной ячейки (серый) с наложенным средним ответом (черный). ( d ) Было обнаружено, что после стимула и смывания strep555 синапсы сильно помечены. Обратите внимание, что красная точка явно совмещена с sypHy. Масштабная линейка = 5 мкм. ( e ) График отображает интенсивность флуоресценции биосина для отдельных синапсов как функцию изменения флуоресценции, измеренной с помощью sypHy (n = 145 синапсов из 6 клеток).Черная линия представляет собой наилучшее линейное соответствие набору данных, ограниченное прохождением через начало координат. Значения показаны как среднее ± SEM.
Biosyn маркирует везикулы, которые спонтанно сливаются
Синапсы также подвергаются событиям спонтанного слияния, которые не зависят от активности нейронов. Визуализация этих событий оказалась сложной задачей с помощью доступных инструментов и привела к важным расхождениям в интерпретации идентичности пула пузырьков. Мы провели эксперименты, чтобы проверить, может ли Biosyn надежно и с достаточной чувствительностью обнаруживать эти спонтанные события.После гашения поверхностного биотина с помощью strep647 мы инкубировали нейроны, экспрессирующие биосин, со strep555 в течение 15 минут при 37 ° C, в присутствии тетродотоксина (TTX), чтобы подавить потенциал действия, зависящего от Na + , и в отсутствие внеклеточного кальция, чтобы избежать любого релиз, зависящий от активности (). Мы обнаружили, что strep555 puncta явно совмещена с предполагаемыми синапсами, идентифицированными синаптическим маркером sypHy (). Кроме того, интенсивность поверхностного strep647 сильно коррелировала с интенсивностью strep555, предполагая, что фракция поверхности биосина легко смешивается с биосином, присутствующим в везикулах, высвобождаемых спонтанно (; коэффициент корреляции R = 0.77, р <0,05). Действительно, эксперименты, в которых импульсы стрептавидина доставляются для маркировки поверхностной фракции биосина до и после спонтанного слияния, выявили существенное перемешивание на плазматической мембране (Бен Фредж и Буррон, неопубликованные наблюдения). Что еще более важно, мы измерили время спонтанного высвобождения пузырьков (). Наши данные показывают, что существует ограниченный пул пузырьков, которые насыщаются с постоянной времени около 6 минут. Как и ожидалось, эта форма высвобождения зависела от температуры, так что при комнатной температуре после 15 минут самопроизвольного слияния было помечено только 55% пула (пустой кружок).Наши результаты согласуются с предыдущими оценками спонтанного высвобождения в нейронах гиппокампа, показывая, что большая часть спонтанного пула высвобождается в течение 10-15 минут 5 , 6 . Однако любые события быстрого временного слияния 18 могут препятствовать связыванию стрептавидина с молекулами биосина в везикуле. В таком случае наша измеренная постоянная времени будет представлять собой завышенную оценку фактического значения, хотя это не повлияет на общий размер пула.
Визуализация везикул, спонтанно высвобождаемых с помощью биосина( a ) Схематическая диаграмма, показывающая график экспериментального протокола.После мечения поверхностного биосина strep647 (синяя полоса) в течение 30 секунд спонтанное слияние везикул было помечено strep555 (красная полоса) в присутствии TTX, номинально нулевым кальцием, и инкубировано при 37 ° C в течение 15 минут. После промывки нейроны фиксировали и отображали. ( b ) Нейроны гиппокампа котрансфицировали biosyn и sypHy. На изображениях показаны отдельные синапсы, экспрессирующие sypHy (зеленый), события спонтанного слияния везикул, помеченные Strep555 (красный), и поверхностный биосин, меченный strep647 (синий).Масштабная линейка = 5 мкм. ( c ) График интенсивности флуоресценции для спонтанного биосина по сравнению с поверхностным биосином для отдельных синапсов (n = 545 синапсов из 28 клеток). ( d ) Динамика спонтанного слияния пузырьков. Нейроны гиппокампа обрабатывали strep555 в течение разных периодов времени. График показывает интенсивность флуоресценции спонтанного мечения как функцию времени воздействия strep555. Данные соответствовали следующей экспоненциальной функции: F = F max — F 1 exp (-t / τ) , где F — флуоресценция спонтанного высвобождения, F max — максимальная флуоресценция, t — время и τ — постоянная времени.Мы обнаружили, что пул везикул высвобождается спонтанно с постоянной времени (τ) 6,2 мин при 37 ° C (темные кружки; n = 18-25 клеток на условие). Незакрашенный кружок представляет собой единственную временную точку через 15 минут, выполняемую при комнатной температуре. Значения показаны как среднее ± SEM.
Спонтанное и вызванное слияние везикул с использованием двух разных пулов везикул
Удивительно, но размер спонтанно высвобождаемого пула везикул был примерно вдвое меньше размера вызванного пула (спонтанный пул: 0,46 ± 0.05, n = 21 нейрон; данные, нормированные на вызванные: 1 ± 0,50, n = 64 нейрона). Если бы обе формы выпуска использовали один и тот же набор везикул, можно было бы ожидать, что размер обоих пулов будет одинаковым. Это несоответствие можно объяснить одним из двух способов: 1 — только часть этих пузырьков, высвобождаемых в ответ на активность, также способна к спонтанному слиянию; 2 — каждый способ высвобождения использует отдельные пулы везикул. Чтобы разделить эти две возможности, мы использовали важное свойство биосина: везикулы, которые подвергаются слиянию на пресинаптическом конце, могут быть помечены отдельно и последовательно разными флуоресцентными маркерами.Таким образом, насыщая все сайты связывания биосина везикул, участвующих в одном режиме высвобождения, мы могли бы затем проверить, было ли затронуто количество везикул, мобилизованных другим способом высвобождения.
Синапсы сначала стимулировали насыщающим стимулом в виде двух 90-секундных деполяризаций в присутствии strep488, который сильно метил весь рециклирующий пул (). Дальнейший деполяризующий стимул в strep594 привел к отсутствию дальнейшего мечения (или очень небольшому количеству мечения), поскольку все сайты связывания биосина были заняты strep488, подтверждая, что наш деполяризующий стимул мобилизовал все возможные везикулы ().С другой стороны, после маркировки рециркулирующего пула с помощью strep488, дальнейшее 15-минутное воздействие strep594 в условиях, которые допускали бы только события спонтанного слияния, привело к значительному количеству маркировки (; что важно, вызванные везикулы не стали доступными для высвобождения в течение периода спонтанного мечения, как показано на дополнительном рис. 4). Распределение совокупной интенсивности для спонтанного мечения было очень похоже, когда спонтанное высвобождение анализировалось до или после высвобождения вызванного пула (; сплошная и пунктирная линия, соответственно), предполагая, что истощение всего рециклирующего пула везикул не повлияло на общий размер стихийного бассейна.Однако, когда спонтанное мечение было проанализировано после того, как спонтанный пул был предварительно мобилизован, мы обнаружили сильное снижение окрашивания биосином (пунктирная линия), как и ожидалось для времени мечения, близкого к насыщению. Точно так же кумулятивное распределение интенсивности для вызванного высвобождения не зависело от спонтанного высвобождения (; сплошная и пунктирная линия), но сильно уменьшалось после того, как насыщающий стимул высвободил весь рециклирующий пул (пунктирная линия). В основе нашего выбора стимуляции была необходимость маркировать пулы везикул с высокой специфичностью, без каких-либо перекрестных помех.Чтобы достичь этого, мы использовали температурную зависимость спонтанного высвобождения (см.), Выполнив все наши стимуляции с высоким K + при комнатной температуре, чтобы минимизировать спонтанные события. Таким образом, мы смогли выделить каждый пул везикул с минимальным загрязнением. показывает средние данные, собранные из трех независимых экспериментов (включающих от 21 до 65 клеток на состояние и в среднем 20 синапсов на клетку). Здесь данные были объединены из экспериментов с использованием различных флуорофоров, и каждое условие было нормализовано к размеру рециркулирующего пула, т.е.е: интенсивность меченого биосина после двух последовательных приступов деполяризации. Наиболее очевидной особенностью наших данных является то, что интенсивность спонтанного высвобождения не зависела от порядка, в котором он был помечен (все спонтанные измерения не показали значимой разницы между ними, p> 0,05, односторонний дисперсионный анализ). Этого можно ожидать, если спонтанные и вызванные везикулы различны. В соответствии с этим, интенсивность вызванного высвобождения также не изменилась независимо от того, был ли биосин мечен до или после спонтанного мечения (нет значимой разницы, p> 0.05, односторонний дисперсионный анализ). Вместе наши данные показывают, что существует два независимых режима высвобождения пузырьков на пресинаптическом окончании нейронов гиппокампа, и что каждый использует отдельный набор пузырьков.
Два отдельных пула везикул с разными режимами высвобождения: спонтанный и вызванный( a ) Две последовательные деполяризации с помощью strep488 (зеленый) маркируют весь рециклирующий пул. Дальнейшая деполяризация с помощью strep594 (красный) не приводит к дальнейшей маркировке. ( b ) Маркировка рециклирующего пула (зеленый) с последующим спонтанным маркированием (красный) приводит к сильному сигналу в обоих каналах, предполагая, что каждый набор везикул происходит из двух разных пулов.Масштабная линейка = 5 мкм. ( c ) Пример из одного набора сестринских культур, показывающий кумулятивное распределение интенсивности флуоресценции для синапсов, меченных Strep594, для спонтанного слияния до (серая линия, n = 140 синапсов) и после (сплошная линия, n = 185 синапсов) деполяризации ( средняя интенсивность не значима между двумя условиями; однофакторный дисперсионный анализ, p> 0,05). Пунктирная линия показывает спонтанное мечение после того, как весь пул спонтанных везикул был помечен другим цветом (n = 85 синапсов; статистически значимо по сравнению с любым из двух условий, нанесенных на график; односторонний дисперсионный анализ ANOVA, p <0.001). Обратите внимание, что истощение рециклируемого (зависимого от активности) пула не влияет на размер спонтанного пула. ( d ) Кумулятивное распределение интенсивности флуоресценции для синапсов из тех же сестринских культур, меченных Strep488, с использованием деполяризующего стимула до (сплошная линия, n = 185 синапсов) и после (серая линия, n = 140 синапсов) высвобождения спонтанного пула (средняя интенсивность не значима между двумя условиями; однофакторный дисперсионный анализ, p> 0,05). Пунктирная линия показывает вызванное мечение после того, как весь пул вызванных везикул помечен другим цветом (n = 263 синапса; статистически значимо по сравнению с любым из двух условий, нанесенных на график; однофакторный дисперсионный анализ ANOVA, p <0.001). Обратите внимание, что (c) и (d) используют разные флуоресцентные зонды (strep594 и strep488 соответственно). Интенсивности флуоресценции можно сравнивать только между кривыми одного и того же графика. Значения показаны как среднее ± SEM.
Количественная оценка интенсивности флуоресценции для различных условий( a ) На графике показана интенсивность флуоресценции синапсов, помеченных деполяризующим стимулом (D) или во время спонтанного высвобождения (S). Каждое условие включает в себя несколько протоколов маркировки, последовательность которых показана под каждой полосой.График интенсивности флуоресценции соответствует тому, что показан в виде закрашенных квадратов / прямоугольников (черный), тогда как пустые квадраты / прямоугольники представляют собой обработки, которые не показаны на графике выше. Первые два столбца (слева) показывают интенсивность везикул, помеченных деполяризующими стимулами, доставленными до или после другого деполяризующего стимула (n = 64 нейрона для каждого столбца). Следующие два столбца также представляют интенсивность везикул, помеченных деполяризующими стимулами, на этот раз до или после спонтанного высвобождения (n = 28 и n = 32 нейрона, соответственно).Следующий набор из четырех столбцов соответствует интенсивности спонтанно помеченных везикул. Независимо от того, когда оценивается спонтанное высвобождение (само по себе, до или после деполяризующего стимула), общая интенсивность спонтанного мечения очень похожа (n = 21, n = 27 и n = 32 нейрона соответственно). Обратите внимание, что спонтанное мечение после мобилизации спонтанного пула значительно снижается, что указывает на насыщение пула. Последняя полоса представляет собой контроль, чтобы показать, что мечение поверхности биосина (30-секундное воздействие стрептавидина) насыщает все сайты связывания биосина (n = 14 нейронов).Статистический анализ проводился с использованием непараметрического одностороннего теста ANOVA. нс: недостоверно (p> 0,05). ( b ) График, показывающий интенсивность флуоресценции спонтанного пула в зависимости от интенсивности флуоресценции рециклирующего пула для отдельных синапсов (серые точки) и сгруппированных в ячейки по 30 (черные кружки; n = 989 синапсов из 26 клеток) ). Обратите внимание на значительную степень корреляции (коэффициент корреляции = 0,57, p <0,05). Значения показаны как среднее ± SEM.
Ранее предполагалось, что количество спонтанного высвобождения в бутоне хорошо коррелирует с вероятностью высвобождения 3 или мерой вызванного высвобождения 11 .Мы также обнаружили высокую степень корреляции между размером спонтанного и вызванного пула везикул, измеренного в одном и том же синапсе (; коэффициент корреляции R = 0,57, p <0,05). Эти данные предполагают, что свойства спонтанного высвобождения могут точно отражать свойства вызванного высвобождения. Однако мы также отмечаем, что есть группа синапсов, которые демонстрируют склонность к спонтанной маркировке с низким количеством вызванной маркировки (, точки в верхней левой части графика). Мы не уверены, что представляют собой эти синапсы, хотя предварительные данные предполагают, что они могут представлять собой недавно сформированные незрелые синаптические контакты (неопубликованные наблюдения).Для дальнейшего установления их личности необходимы дополнительные экспериментальные данные.
Идентичность спонтанного пула
Если рециклирующий пул пузырьков не может объяснить спонтанное высвобождение, то откуда эти пузырьки? На пресинаптических окончаниях имеется пул пузырьков, которые не могут быть мобилизованы нейрональной активностью и функция которых в значительной степени неизвестна. В общем, он упоминается как «резервный пул» везикул 10 и является возможным кандидатом для спонтанного высвобождения.В предыдущих исследованиях использовались зонды на основе pH-фторина вместе с методом щелочной ловушки для определения размера различных пулов синаптических везикул, включая пул покоя 17 , 19 . показывает, как мы применили этот метод к синапсам, выражающим sypHy, для измерения относительных размеров рециклирующих и покоящихся пулов. Аксоны стимулировали насыщающим стимулом (900 AP при 20 Гц) в присутствии антагониста везикулярного протонного насоса бафиломицина для мобилизации всего рециклирующего пула.Обратите внимание, как стимул приводит к увеличению флуоресценции, которая не возвращается к исходному уровню, поскольку любое повторное окисление после эндоцитоза ингибируется бафиломицином (). Однако есть ряд пузырьков, которые не могут высвободиться во время стимула и, как говорят, принадлежат к пулу покоя. Эти везикулы можно раскрыть с помощью аммиака (см. Методы), чтобы гомогенизировать pH на всех мембранах 19 и, следовательно, расшифровать любые везикулы, которые не подверглись рециркуляции. В этом примере аммиак вызвал 1.5-кратное увеличение флуоресценции, что указывает на то, что размер покоящегося пула везикул составляет примерно половину размера рециклируемого пула. В среднем мы обнаружили, что отдыхающий пул внес дополнительные ~ 60-70% везикул, что согласуется с предыдущими измерениями 19 .
Измерение пулов везикул с помощью sypHy( a ) Изменения флуоресценции одного нейрона в ответ на 900 AP при 20 Гц для мобилизации всего рециклирующего пула. Разгрузка оставшихся везикул с помощью Nh 4 Cl раскрывает оставшийся пул.(b ) Был проведен тот же эксперимент, что и в (а), на этот раз допуская спонтанное высвобождение после мобилизации рециклирующего пула. Один нейрон стимулировали 900 AP с частотой 20 Гц для мобилизации всего рециклирующего пула. Синапсы оставляли на 15 мин при комнатной температуре в присутствии ТТХ, чтобы установить, могут ли везикулы высвобождаться спонтанно. Наконец, любые оставшиеся везикулы расщепляли добавлением Nh 4 Cl. Размер рециклирующего пула и остающегося пула везикул показан для каждой ячейки.( c ) Примеры изображений пресинаптических окончаний нейрона, показанного на (b), после различных обработок. Вверху слева направо: синапсы в состоянии покоя и после 900 AP при 20 Гц; снизу слева направо: синапсы после спонтанного высвобождения в течение 15 минут при комнатной температуре, в ТТХ и 2 мМ кальция и после гашения всех везикул с помощью Nh 4 Cl. Масштабная линейка = 5 мкм. Значения показаны как среднее ± SEM.
Чтобы проверить, привлекает ли спонтанное слияние пузырьки из покоящегося пула, мы выполнили эксперимент, аналогичный описанному в, только на этот раз, после мобилизации всего рециклирующего пула, синапсы были оставлены для самопроизвольного высвобождения в присутствии бафиломицина.Любое увеличение флуоресценции будет представлять собой спонтанное слияние везикул, которые не принадлежат рециклирующему пулу и, следовательно, должны принадлежать пулу отдыха. Пример показан в. После стимуляции в среду добавляли ТТХ и синапсы оставляли нестимулированными в течение 15 мин. при комнатной температуре. Наши предыдущие эксперименты по изучению динамики спонтанного слияния уже установили, что при этой температуре будет мобилизовано 55% спонтанного пула (см.). В соответствии с этим, мы обнаружили увеличение флуоресценции, которое составляло около 60% от оставшегося пула.Общий размер остаточного пула был установлен путем расхолаживания аммонием, который в этом примере ячейки был довольно большим (таким же большим, как рециркулирующий пул). Объединенные данные из всех наших ячеек показаны в, где значения были нормализованы к начальному размеру рециркулирующего пула. В среднем синапсы имели размер неактивного пула, который был чуть более половины размера рециклирующего пула (контрольные синапсы: 59 ± 0,12%; синапсы после спонтанного высвобождения: 71 ± 0,26%; статистически не различаются). Важно отметить, что самопроизвольное слияние при комнатной температуре уменьшало количество везикул, которые впоследствии были расщеплены аммиаком, на две трети (красная кривая внутри), указывая на то, что в этом способе высвобождения использовались везикулы из покоящегося пула.Наши данные с использованием sypHy подтверждают, что существует два независимых пула везикул с разными способами высвобождения и что спонтанное слияние вытягивает пузырьки из покоящегося пула.
Спонтанный пул везикул соответствует пулу покоя( a ). На графике показан график изменения флуоресценции (нормализованный к пулу рециркуляции) после различных обработок. После мобилизации всего рециклирующего пула насыщающим стимулом из 900 AP при 20 Гц нейроны либо немедленно обрабатывают Nh 4 Cl (черный след, n = 6 клеток), либо позволяют спонтанно высвобождаться в течение 15 минут в TTX, при комнатной температуре и затем обработали Nh 4 Cl (красный след, n = 7 клеток).Схема ниже дает временное представление экспериментального протокола. ( b ) График, показывающий график изменения амплитуды флуоресценции, измеренной с помощью sypHy, для вызванного высвобождения в отдельных синапсах (черные квадраты) в зависимости от изменения флуоресценции при спонтанном высвобождении. Черная пунктирная линия представляет наилучшее линейное соответствие данным (коэффициент корреляции = 0,62, p <0,05). Значения показаны как среднее ± SEM.
Наконец, мы обнаружили, что общий размер рециркулирующего пула коррелирует с количеством спонтанного высвобождения, которое произошло в течение 15-минутного периода при комнатной температуре ().Это согласуется с нашими выводами с использованием biosyn (), но не соответствует недавним открытиям с использованием аналогичного зонда 20 . Однако предыдущие исследования также показали четкую корреляцию между размером пула рециклинга и размером пула спонтанных везикул 5 или между показателем вызванного высвобождения и спонтанным слиянием везикул 3 , 11 . Наши данные с использованием двух разных зондов подтверждают наличие значительной корреляции между размерами двух пулов везикул.
Discussion
Мы разработали новый генетически кодируемый зонд, biosyn, чтобы необратимо маркировать везикулярные белки и использовали его для изучения цикла пузырьков в пресинаптических окончаниях. Мы показываем, что biosyn можно использовать для сообщения о событиях слияния везикул, которые происходят в ответ на активность нейронов, а также о менее частых событиях спонтанного слияния, которые происходят стохастически в пресинаптических бутонах. Важно отметить, что этот метод позволяет маркировать подмножества везикул последовательно и разными флуоресцентными маркерами.Используя это свойство, мы смогли выделить два пула пузырьков с очень разными свойствами. Один набор везикул может быть мобилизован нейрональной активностью кальций-зависимым образом и соответствует хорошо охарактеризованному рециклирующему пулу. Мы обнаружили, что существует еще один независимый набор пузырьков, которые спонтанно сливаются с плазматической мембраной кальций-независимым образом. Эти везикулы не являются частью рециклирующего пула, а принадлежат к «покоящемуся» пулу пузырьков, роль которых ранее была неизвестна.Критические доказательства в поддержку наших выводов получены из экспериментов с двойным импульсом (показаны и количественно определены на), где каждый пул везикул помечен последовательно двумя флуоресцентными стрептавидинами. Мы обнаружили существенную маркировку событий спонтанного слияния в синапсах, где рециклирующий пул был ранее помечен. Более того, размер спонтанного пула был таким же при измерении до или после насыщения рециркулирующего пула. Наши данные утверждают, что существует пул пузырьков, который постоянно рециркулирует в состоянии покоя и невосприимчив к нейронной активности.
Постоянно рециркулирующий пул везикул
Везикулы организованы в отдельные пулы. Вообще говоря, в пресинаптических терминалах есть три пула пузырьков: быстро высвобождаемый пул, резервный пул и резервный пул 7 . Первые два образуют рециклирующий пул и представляют собой везикулы, которые мобилизуются в ответ на нейронную активность. Роль покоящегося пула менее изучена, поскольку его определяющей характеристикой является то, что он невосприимчив к активности нейронов 10 .Экспериментально «покоящийся пул» изначально определялся как те пузырьки, которые нельзя было окрасить красителями FM во время стимуляции. Исследования фотопреобразования показали, что даже после сильных стимулов только часть пузырьков в синапсе поглотила краситель 9 . Параллельные исследования показали несоответствие между количеством везикул, подсчитанных после окрашивания рециклирующего пула красителями FM, и гораздо большим количеством синапсов, наблюдаемых при ЭМ-реконструкциях синаптических бутонов 3 , 21 .Совсем недавно измерения размеров пула везикул с использованием spH также обнаружили пул отдыха с примерно схожими характеристиками 19 , 22 . Было обнаружено, что размер этого пула сильно варьируется вдоль аксона и не обнаруживает какой-либо очевидной корреляции с размером рециклирующего пула 22 . О подобных пулах также сообщалось в нервно-мышечном соединении дрозофилы с использованием красителей spH 23 и FM 24 , хотя считается, что этот пул может быть мобилизован, когда эндоцитоз везикул заблокирован 23 .Мы провели аналогичные эксперименты с генетически кодируемым репортером цикла везикул sypHy и обнаружили, что спонтанное высвобождение привлекает везикулы именно из покоящегося пула. Наши результаты не только предоставляют доказательства существования двух пулов везикул с разными режимами высвобождения, но также проливают свет на функцию покоящегося пула в синапсе.
Возможная роль для событий спонтанного слияния
Интригующая возможность, поднятая нашими экспериментами, состоит в том, что спонтанное слияние может фактически представлять спонтанное высвобождение нейротрансмиттера в синапсе и, следовательно, соответствовать миниатюрным событиям.Предыдущие результаты показали доказательства как за, так и против отдельных пулов везикул, участвующих в вызванном и спонтанном высвобождении нейромедиаторов 6 , 25 . В недавнем исследовании диссоциированных нейронов гиппокампа использовались FM-красители вместе с электрофизиологией для описания существования пула везикул, которые спонтанно сливаются с плазматической мембраной, но лишь неохотно мобилизуются нейрональной активностью 5 . Они выдвигают гипотезу, что спонтанно высвобождаемые везикулы почти не смешиваются с резервным пулом, а вместо этого постоянно и в некоторой степени независимо от нейрональной активности совершают цикл.Совсем недавно исследование ГАМКергических нейронов показало, что спонтанные и вызванные пулы пузырьков сосуществуют в синапсе и могут независимо модулироваться каинатом 12 . Однако эти противоречивые результаты были оспорены 6 , что согласуется с предыдущим исследованием, которое обнаружило, что спонтанно высвобождаемые пузырьки в подмножестве синапсов также могут быть мобилизованы с помощью нейрональной активности 11 . Непонятно, почему возникли эти расхождения, поскольку во всех исследованиях использовались аналогичные системы, а также аналогичные методы, основанные в основном на кинетике обесцвечивания FM-красителя.Однако метод окрашивания и обесцвечивания FM имеет некоторые недостатки, которые могут затруднить анализ и интерпретацию данных. Длительное воздействие на культуры нейронов красителей FM, необходимых для спонтанного высвобождения окрашивания, может привести к усилению фонового сигнала и неспецифической маркировке. В нашей методике этот недостаток преодолевается за счет использования флуоресцентного стрептавидина в качестве маркера, который представляет собой инертный белок, который легко смывается после длительного воздействия. Кроме того, общий подход к анализу кривых обесцвечивания FM-красителей заключается в вычитании фоновой флуоресценции после стимула и нормализации следа к исходной флуоресценции до стимуляции.В результате любые везикулы, которые не могут быть высвобождены стимулом, будут считаться фоном и вычитаться из 6 . Это оставляет открытой возможность того, что после окрашивания для самопроизвольного слияния большая часть везикул может остаться, но не будет считаться фоном. Наш подход измеряет экзоцитоз напрямую и не зависит от последующего обесцвечивания для экстраполяции идентичности пузырька.
Молекулярная идентичность пулов везикул
Более косвенные доказательства существования двух пулов с разными способами высвобождения получены из ряда исследований, показывающих различия в свойствах и молекулярной идентичности двух способов высвобождения.Нокаутированные мыши, у которых отсутствует кальциевый сенсор для слияния везикул, синаптотагмин I, демонстрируют сильное снижение вызванного высвобождения нейротрансмиттера, но без изменения мини-частоты и значительного увеличения асинхронного высвобождения 26 , 27 . Эта тенденция в некоторой степени присутствует у трансгенных мышей, у которых отсутствует белок SNARE SNAP-25. Мыши с нокаутом этого гена обнаруживают заметное снижение вызванного высвобождения, но везикулы все еще были способны к спонтанному слиянию, хотя и с более низкой частотой 28 .Более удивительно то, что мыши, лишенные другого белка SNARE, VAMP-2 (синаптобревин-2), резко снижают как спонтанное, так и вызванное высвобождение, но также приводят к смешиванию между двумя пулами везикул, что предполагает роль VAMP-2 в сегрегации каждого режима. выпуска 5 . У дрозофилы мутанты по нейрональному синаптобревину (n-syb) 29 , синтаксину 30 или белку цепочки цистеина (csp) 31 селективно отменяют вызванное нервом высвобождение нейротрансмиттера, оставляя спонтанное высвобождение относительно невозмущенным.Альтернативный фенотип, наблюдаемый в некоторых условиях, — это усиление спонтанного высвобождения. Избыточная экспрессия syt12 (низкоаффинного сенсора кальция) в диссоциированных нейронах 32 или потеря комплексина I дрозофилы 33 приводит к увеличению частоты mEPSC с отсутствием или только небольшими изменениями амплитуды EPSC, соответственно. Однако потеря комплексина 1 и 2 в нейронах гиппокампа крыс показывает сильное увеличение спонтанной мини-частоты за счет вызванного высвобождения 34 .В совокупности эти данные предполагают, что спонтанное высвобождение требует других молекулярных требований для вызванного высвобождения. Такие косвенные свидетельства усиливают идею о том, что каждый способ выпуска независим. Тем не менее точный молекулярный состав каждого набора везикул еще предстоит установить.
Одним из неизвестных аспектов наших открытий является субклеточное распределение и сайты слияния для каждого режима высвобождения. Например, возможно, что события спонтанного слияния, описанные здесь, происходят на участках, удаленных от активной зоны, но все еще в пределах границ бутона.В ленточных синапсах биполярных нейронов сетчатки вызванное деполяризацией высвобождение происходило в активной зоне, тогда как спонтанное слияние преобладало в соседних областях, на расстоянии от ленты 35 . Такое поведение может приводить к спонтанному высвобождению нейромедиаторов, отбирающим особую популяцию постсинаптических рецепторов из тех, которые используются при вызванном высвобождении. В соответствии с этим, недавнее исследование предложило, что мини активируют отдельный, но частично перекрывающийся набор рецепторов NMDA, чем те, которые активируются вызванным высвобождением 20 .Это наводящее на размышление открытие предполагает, что высвобождение мини-нейромедиаторов и вызванных нейротрансмиттеров может происходить в разных местах синапса и оказывать свое влияние на отдельные участки постсинаптического позвоночника. Эксперименты по визуализации с более высоким разрешением могут различать события слияния в разных регионах пресинаптического терминала 36 .
Методы
Культуры гиппокампа и трансфекция
Первичные культуры гиппокампа получали из эмбриональных крыс Sprague-Dawley на 18-е сутки.Гиппокампы диссоциировали с использованием трипсина (5 мг / мл в течение 15 минут при 37 ° C, Уортингтон, Великобритания), растирали и наносили на покровные стекла, покрытые поли-D-лизином (50 мкг / мл) и ламинином (20 мкг / мл). Нейроны инкубировали при 37 ° C и 5% CO2 в культуральной среде на основе нейробазала с добавлением B27, глутамакса (Gibco) и pen / strep. Через 6-7 дней культивирования нейроны трансфицировали с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen). Эксперименты проводились примерно через 14 дней in vitro, когда синапсы считались зрелыми.
Конструкции и плазмиды
Слитые белки были получены между VAMP2 и последовательностью акцепторного пептида биотина с небольшой линкерной последовательностью, разделяющей их.Последовательность BAP была получена путем отжига следующих олигонуклеотидов: 5 ‘- CC GGT GGC CTG AAC GAT ATT TTC GAA GCT CAG AAA ATC GAA TGG CAC GAA GGC GGC TCT TAA T — 3′ и 5’-CT AGA TTA AGA GCC TTC GTG CCA TTC GAT TTT CTG AGC TTC GAA AAT ATC GTT CAG GCC A — 3 ′. Это приводит к последовательности BAP (GLNDIFEAQKIEWHE) с двумя липкими концевыми хвостами, которые мы использовали для лигирования ее в C-концевой конец конструкции VAMP2-линкера с использованием AgeI / XbaI. Конструкция VAMP2-линкер была первоначально получена от доктора Миссенбока как часть конструкции VAMP2-линкер-pHluorin, клонированной в плазмиду pCI (Promega).Мы удалили pHluorin и заменили его доменом BAP, что привело к слиянию VAMP2-линкер-BAP. Мы называем эту конструкцию VAMP2-BAP.
Фермент BirA (GenBank: {«type»: «entrez-protein», «attrs»: {«text»: «P06709», «term_id»: «115015», «term_text»: «P06709»}} P06709 ) экспрессионная плазмида (pCDNA3) была любезно предоставлена доктором О. Берроне (Predonzani et al., 2008). Он состоит из фермента биотинлигазы E. Coli, BirA, с секреционной последовательностью, добавленной к его N-концу, что приводит к плазмиде pCDNA3-sec-BirA.
Мечение и визуализация везикул с помощью Biosyn
Первичные нейроны гиппокампа котрансфицировали плазмидами VAMP2-BAP и BirA в количестве 6-7 дел. Сразу после трансфекции в среду добавляли 100 мкМ биотина. Через неделю были проведены эксперименты, чтобы убедиться, что синапсы достигли зрелости. Эксперименты проводили в физиологическом растворе Hepes-буфера (HBS) (в мМ): 139 NaCl, 2,5 KCl, 10 Hepes, 10 D-глюкоза, 2 CaCl 2 , 1,3 MgCl 2 (pH 7,3 и 290 мОсмоль).Сначала нейроны промывали HBS для удаления избытка биотина и инкубировали в течение 30 с в стрептавидин-Alexa 647 (1: 250, Invitrogen) для мечения всего биотинилированного VAMP2, присутствующего на поверхности плазматической мембраны. Чтобы маркировать рециклируемый пул синаптических везикул, нейроны еще трижды промывали HBS для удаления избытка Strep-647, а затем дважды деполяризовали в течение 90 секунд путем инкубации в растворе с высоким содержанием K + , содержащем (в мМ): 78,5 NaCl, 60 KCl, 10 D-глюкоза, 10 HEPES, 2 CaCl 2 , 1.3 MgCl 2 , стрептавидин-Alexa 488 (1: 250), 0,001 TTX, 0,025 APV и 0,02 CNQX. Каждую деполяризацию разделяли 5 мин. После этой обработки за последней деполяризацией следовала 5-минутная пауза перед фиксацией. Чтобы пометить везикулы, циклически повторяющиеся спонтанно, нейроны промывали 3 раза не содержащим кальция HBS и инкубировали в течение 15 минут при 37 ° C в присутствии стрептавидин-Alexa 555, 1 мкМ TTX, 25 мкМ APV и 20 мкМ CNQX. Затем клетки промывали HBS и фиксировали. Процедура фиксации состояла из 30-минутной инкубации с 4% PFA / 0.33 М. сахароза. Изображения были получены с использованием конфокального микроскопа Zeiss LSM 510, микроскопа FV1000 Olympus или инвертированного микроскопа Olympus IX71 с использованием камеры CCD и программного обеспечения Slidebook (Intelligent Imaging Innovations, Санта-Моника). Синапсы, окрашенные alexa 488, alexa 555 и alexa 647, которые были отображены на конфокальных микроскопах с соответствующими фильтрами. В экспериментах на установке формирования изображений с широким полем (Olympus IX71) использовались клетки, окрашенные alexa 488 и alexa 594, со следующими фильтрами: фильтры возбуждения: полосовые фильтры 470 +/- 15 нм и полосовые фильтры 565 +/- 22 нм; дихроичный: полоса пропускания 515 +/- 20 нм, длина прохода 590 нм; эмиссионный фильтр: полосовой фильтр 510 +/- 15 нм и полосовой фильтр 650 +/- 36 нм.Фильтры возбуждения и испускания чередовались с помощью колеса фильтров. Мы убедились, что между каналами не было значительного просачивания, и при использовании конфокальной микроскопии изображения сканировались последовательно каждым лазером, чтобы избежать перекрестных помех.
SynaptopHysin-pHluorin imaging
Плазмида SypHy была подарком д-ра Л. Лагнадо. Эксперименты проводились, как описано ранее (Li et al., 2004). Вкратце, покровные стекла помещали в специально изготовленную камеру, оснащенную парой параллельных платиновых электродов на расстоянии ~ 5 мм друг от друга.Нейроны стимулировали подачей импульсов тока 1 мс, 25 мА с использованием стимулятора SD9 (Grass Instruments), время которого контролировалось TTL-сигналом из программного обеспечения для визуализации (Slidebook). Бафиломицин А (Calbiochem) использовали в конечной концентрации 1 мкМ. Изображения были получены с использованием инвертированного микроскопа Olympus IX71 с камерой CCD (coolsnap HQ), управляемой программным обеспечением Slidebook (Intelligent Imaging Innovations, Санта-Моника). Источником света служила ксеноновая дуговая лампа (Lambda LS, Sutter), в которой воздействие света регулировалось быстродействующим затвором (Sutter smartShutter), управляемым контроллером лямбда 10-3 Sutter Instruments, оснащенным полосовым фильтром возбуждения 470 ± 20 нм. (Chroma Tech.Corp.) и подходящие фильтры нейтральной плотности. Использовались только нейроны, у которых после обработки аммиаком в среднем наблюдалось увеличение флуоресценции более чем на 20%. Небольшое количество нейронов (6 из 21 нейрона) не показало увеличения флуоресценции, и эти клетки были исключены из анализа.
Анализ данных
Изображения были экспортированы в виде файлов TIFF и проанализированы с использованием специально написанных процедур в MATLAB (MathWorks Inc., Натик, Массачусетс), как описано ранее (Li et al., 2004).Вкратце, квадратные области интересов (ROI; шириной 8 × 8 пикселей) были нарисованы вокруг синапсов (обычно 4-6 пикселей в диаметре), и средняя интенсивность флуоресценции для каждого синапса была рассчитана в его наилучшей фокусной точке. При анализе данных бутонов, окрашенных как для спонтанных, так и для вызванных событий слияния, области интереса были выбраны в канале, используемом для маркировки вызванных событий, и затем те же координаты области интереса были применены к другим каналам. Таким образом, мы позаботились о том, чтобы брать только синапсы с метками, зависящими от активности.Статистические сравнения были выполнены с использованием ANOVA или t-критериев. Статистический анализ был выполнен с помощью программного обеспечения Prism. Нормальность оценивалась с помощью комплексного теста д’Агостино и Пирсона. Если образцы следуют распределению Гаусса, мы использовали соответствующие параметрические тесты. Если это предположение не выполняется, мы использовали непараметрический тест. Описательная статистика представлена как среднее значение ± стандартная ошибка среднего.
Бассейн Тремонт — Верхний Арлингтон
COVID-19:
Если вы плохо себя чувствуете или у вас поднялась температура, оставайтесь дома.Если вы не проходите вакцинацию, мы рекомендуем носить маску, когда вы не можете находиться на социальной дистанции. Мы будем регулярно очищать общие точки соприкосновения.
Определения Season Pass:
Резидент UA — человек, который живет или работает в Верхнем Арлингтоне. Для проверки может потребоваться копия счета за коммунальные услуги, договора аренды, акта, платежной квитанции или налоговой ведомости.
Дети-иждивенцы — не состоящее в браке лицо моложе 24 лет, проживающее в настоящее время дома. Или приемному ребенку, который в настоящее время живет в доме, может потребоваться проверка.
Идентификатор держателя пропуска:
Департамент парков и отдыха Верхнего Арлингтона переходит с карточки держателя проездного на брелок для ключей. брелок позволит владельцу пропуска использовать один идентификатор для плавания, тенниса и других программ парков и развлечений. Владельцы пропуска могут забрать свой брелок в офисе парка развлечений и отдыха Аппер-Арлингтона, в Девон-Пул, в аквапарке Рид-Роуд, на теннисных кортах Нортама или в дневном лагере.
Фотографии держателей пропусков:
Все держатели пропусков должны сфотографироваться для идентификации либо в офисе парков и зон отдыха, либо в любом из трех плавательных бассейнов, либо на теннисных кортах Нортэм-Парка.
Прекращение работы в условиях трудностей:
Продажа членских билетов на плавание и теннис является окончательной, за исключением случаев, когда критерии трудностей могут быть задокументированы. Запросы на увольнение из категории «тяжелых условий жизни» рассматриваются в индивидуальном порядке и должны подаваться в письменной форме Менеджеру по водным видам спорта и теннису. Сборы за сезонный абонемент могут быть возвращены или выпущены в виде кредитного ваучера, который рассчитывается пропорционально с начала сезона независимо от использования. Запросы не будут приниматься после 31 августа. После утверждения всех запросов, связанных с трудностями, взимается комиссия за обработку в размере 5 долларов.
Один или несколько из следующих критериев должны быть удовлетворены, чтобы претендовать на получение статуса Hardship Termiation:
- Личное состояние здоровья — предоставьте заключение врача на бланке кабинета врача с указанием состояния здоровья, даты состояния и особенностей ограничений.
- Переезд — за пределами 25-мильного радиуса от Центра муниципальных услуг — предоставьте подтверждение переезда (акт или договор аренды).
- Покровитель смерти
Дети до 10 лет:
Все дети до 10 лет должны сопровождаться и находиться под присмотром родителей или квалифицированного опекуна.
Суровая погода:
В случае суровых погодных условий Департамент парков и отдыха города Верхний Арлингтон оставляет за собой право ограничить использование или закрыть бассейны и теннисные корты. Если в районе молния, гром или суровая погода, необходимо соблюдать следующие процедуры:
- Все бассейны и террасы будут полностью эвакуированы.
- Посетители должны покинуть объект и искать убежище для своей безопасности.
- Во время предупреждения о сильном шторме Национальной метеорологической службы объект будет закрыт до истечения срока действия предупреждения о сильном шторме.
- Национальная метеорологическая служба считает, что гроза закончилась через 30 минут после последнего грома и / или молнии. В это время посетителям будет разрешено повторно войти в объект.
- Если суровая погода сохраняется или погодный радар указывает на суровую погоду в течение дня, Департамент парков и отдыха оставляет за собой право закрыть объекты или ограничить их использование.
Холодная погода:
Если прогнозируемая высокая температура в течение дня ниже 70 градусов, Департамент парков и отдыха города Верхнего Арлингтона оставляет за собой право ограничить использование или закрыть бассейны.Все три объекта будут закрыты, если прогнозируемая дневная температура опустится ниже 60 градусов.
Rain Checks:
При суровых погодных условиях и в непредвиденных чрезвычайных ситуациях возмещение средств для дневных госпиталей не предусмотрено. Тем не менее, дождевые чеки будут выдаваться гостю плавательного бассейна, который находился на этом объекте менее двух (2) часов, а также теннисисту, если он провел менее одного (1) часа игры. При запросе проверки дождя гость должен предоставить квитанцию, подтверждающую оплату дневного вступительного взноса.
Remind.com:
Если вы хотите быть в курсе событий, связанных с закрытием бассейнов и специальных мероприятий? Присоединяйтесь к нам на Remind.com, и вы получите текстовое сообщение или электронное письмо с актуальной информацией.
Чтобы присоединиться:
- Devon Pool Напомнить текст @devonpo на номер 81010
- Аквапарк Reed Road Напишите текст @reedroa на номер 81010
- Tremont Pool Напомнить текст @tremontpo на номер 81010
- Теннисные корты Northam Напомнить текст @northamte на номер 81010
Наборы для бассейнов, адаптированные для открытой воды
По всей стране открываются новые бассейны, но некоторые районы все еще не вернулись в нормальное состояние из-за ограниченного пространства и программных потребностей.Это означает, что пловцам, плавающим только в бассейне, возможно, придется выйти в открытую воду, чтобы хорошо потренироваться.
Многие заплывы в открытой воде являются тайм-аутом, который может варьироваться как по усилию, так и по продолжительности. Хотя непросто разбить тренировку на открытой воде на более похожую на тренировку в бассейне, это возможно.
Перед тем, как начать
Чтобы безопасно приспособить плавание в бассейне к открытой воде, вам следует подобрать пару вещей.
- Какие-то часы, которыми можно пользоваться во время плавания.Если вы не хотите вкладываться в умные часы, подойдут простые водонепроницаемые цифровые часы.
- Буксирный поплавок, который можно использовать для переноски предметов для заправки, плавать на нем, если вы столкнетесь с проблемой, и помочь проезжающим лодкам легче вас обнаружить.
- Приятель. Никогда не плавайте в одиночестве.
Вам также нужно будет сделать домашнее задание.
Сначала найдите место для отдыха, возможно, неглубокий пляж или причал. Так же, как стена в бассейне, здесь вы будете отдыхать между подходами. Затем уделите немного времени определению своего курса.
Начиная с точки отдыха, примите время во время плавания к ориентиру не слишком далеко. Если вы знаете свое время для 25 фристайла в бассейне, вы можете использовать свои часы, чтобы приблизительно вычислить, сколько ярдов прошло в зависимости от вашего времени. Вы также можете посчитать свои гребки, если знаете, сколько вы набираете в бассейне.
Нет ограничений на то, как долго вы проделаете свой курс. Просто знайте, на каком ориентире вы хотите остановиться, чтобы ваши подходы были последовательными.
Когда я это сделал, я взял курс, начав с пляжа, и поплыл вдоль берега к соседнему причалу.Это заняло у меня достаточно времени, и я решил, что это около 100 ярдов. Я поплыл и снова отсчитал время с тем же результатом.
Наборы для бассейнов, адаптированные для открытой воды
Обучение IM
Установите курс на 100 ярдов.
- 100 IM с разбивкой по количеству гребков, которое обычно происходит в бассейне (для меня это 12 гребков баттерфляем, 18 гребков на спине, 10 гребков брассом и финиш вольным стилем до причала) на 20-секундном отдыхе.
- 100 билд вольным стилем, отдых 30 секунд.
Повторить 10 раундов
Спринт и восстановление
Установите курс где-то от 25 до 50 ярдов.
- 1 отрезок быстро, 1 отрезок легкий, 20 секунд отдыха
- 2 длины быстро, 1 длина легкая, отдых 20 секунд
- 3 длины быстро, 1 длина легкая, отдых 20 секунд
- 4 длины быстро, 1 длина легкая, отдых 20 секунд
Повторить три или четыре раза.
Инсультная работа
Установите курс от 50 до 100 ярдов.
- Проплывите 10 быстрых гребков на спине, перевернитесь, сделайте пять длинных гребков брассом, повторяйте, пока не дойдете до конечной точки. Отдых 15 секунд
Повторить от шести до 10 длин.
Больше хода
Установите курс на 25 ярдов.
- 10 x 25 с, отдых от 20 до 30 секунд (один быстрый баттерфляй, финиш вольным стилем; два быстрых баттерфляй, финиш вольным стилем; три быстрых баттерфляй, финиш вольным стилем и т. Д.
Повторите до 10 движений баттерфляем.
Последние мысли
Такой подход к открытой воде оказался для меня отличным, и я перестал бояться однообразия плавания вольным стилем вперед и назад. Вы можете добавить набор для разминки и ног, а также использовать буй и ласты, если у вас есть место для их хранения, пока вы ими не пользуетесь.
Не ограничивайте себя и не пытайтесь сравнивать плавание на открытой воде с плаванием в бассейне — это другое дело. Это отличное изменение темпа для тех, кто хочет немного разнообразить обстановку, если вы в течение года притворялись пловцом на длинные дистанции или в открытой воде, пока ваш бассейн был закрыт.
Возможности безграничны. Не зацикливайтесь на точном расстоянии или времени темпа. Подумайте о «быстро» и «легко» с точки зрения усилий. Кроме того, помните, что безопасность прежде всего, поэтому регулируйте все в зависимости от пространства, в котором вы можете безопасно плавать.
.